過冷却プログラム凍結したヒト肝幹細胞を利用した再生外科治療の橋渡し的基礎研究

2016 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 26461921
• 研究機関: 札幌医科大学
• 研究代表者: 水口 徹 札幌医科大学, 医学部, 准教授 (30347174)
• 研究分担者: 谷水 直樹 札幌医科大学, 医学部, 准教授 (00333386) ; 平田 公一 札幌医科大学, 医学部, 教授 (50136959) ; 三高 俊広 札幌医科大学, 医学部, 教授 (50231618) ; 石井 雅之 札幌医科大学, 医学部, 研究員 (50643201) ; 市戸 義久 札幌医科大学, 医学部, 研究員 (80452978)
• 研究期間 (年度): 2014-04-01 – 2017-03-31
• キーワード: 肝再生 / 肝細胞移植 / 幹細胞

研究実績の概要

肝再生置換療法の効率化を目指し、肝幹細胞の抗原発現と細胞のセレクションを行った。CD45- TER119- CD31- EpCAM- ICAM-1+は、アルブミンとHNF4を発現する肝細胞であった。8週齢からのこの細胞は81.9％に単核細胞を認めたが、20週齢では48.0％と減少していた。EpCAM+ICAM+細胞はアルブミンを発現しないが、EpCAM- ICAM-1+はアルブミンを発現しており、この細胞分画に肝幹細胞が含まれている可能性が高い。実際、この細胞をマトリゲル上で培養し、OSM添加することで単層培養の肝細胞と比較してもアルブミン産生は高く、CYP3A4の発現も見られる。肝細胞再生置換モデルにこの細胞を使用した場合、移植前にOSMで前処理することで再生置換効率が上昇した。このことは、OSMによって選定された肝幹細胞の再生誘導を促進する方法を発見し、ヒト細胞への応用が期待できるものと考えている（Tanimizu N, Mizuguchi T, et al. Stem Cells, 2016）。
肝細胞にやや分化傾向にある小型肝細胞はThy1+に細胞に含まれている。肝細胞の再生置換モデルで発生する小型肝細胞クラスターは、Thy1を高率に発現しており、クラスターをマイクロダイセクションし、遺伝子の網羅的解析を行った。結果としてIL17RBの遺伝子発現が亢進しており、リガンドのIL25の誘導が予想された。類洞内皮細胞にIL17RBの誘導を確認し、Kupffer細胞にIL25の誘導を確認した。これらの誘導と小型肝細胞クラスターの形成は生体内でクラスター内に見られたことから、IL25の誘導と関連伝達系の活性化が小型肝細胞のクラスター形成に関与していることを証明した(Ichinohe N, Mizuguchi T, et al. Stem Cells, 2017)。

研究成果

• [雑誌論文] Transplantation of Thy1+ Cells Accelerates Liver Regeneration by Enhancing the Growth of Small Hepatocyte-like Progenitor Cells via IL17RB Signaling. (2017)
  • 著者名/発表者名: Ichinohe N, Ishii M, Tanimizu N, Kon J, Yoshioka Y, Ochiya T, Mizuguchi T, Hirata K, Mitaka T.
  • 雑誌名: Stem Cells. 巻: 35 ページ: 920-931
  • DOI: 10.1002/stem.2548
  • 査読あり
• [雑誌論文] Technical aspects and surgical complications of laparoscopic liver resection. (2017)
  • 著者名/発表者名: Nagayama M, Mizuguchi T, Yamaguchi H, Imamura M, Kutomi G, Okita K, Nishidate T, Takemasa I, Kimura Y.
  • 雑誌名: Ann Laparosc Endosc Surg 巻: 2 ページ: 61
  • DOI: 10.21037/ales.2017.02.25
  • 査読あり / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Liver progenitors isolated from adult healthy mouse liver efficiently differentiate to functional hepatocytes in vitro and repopulate liver tissue. (2016)
  • 著者名/発表者名: Tanimizu N, Ichinohe N, Ishii M, Kino J, Mizuguchi T, Hirata K, Mitaka T.
  • 雑誌名: Stem Cells. 巻: 34 ページ: 2889-2901
  • DOI: 10.1002/stem.2457
  • 査読あり
• [雑誌論文] Olfactory Receptor Family 7 Subfamily C Member 1 Is a Novel Marker of Colon Cancer-Initiating Cells and Is a Potent Target of Immunotherapy. (2016)
  • 著者名/発表者名: Morita R, Hirohashi Y, Torigoe T, Ito-Inoda S, Takahashi A, Mariya T, Asanuma H, Tamura Y, Tsukahara T, Kanaseki T, Kubo T, Kutomi G, Mizuguchi T, Terui T, Ishitani K, Hashino S, Kondo T, Minagawa N, Takahashi N, Taketomi A, Todo S, Asaka M, and Sato N
  • 雑誌名: Clin Cancer Res 巻: 22 ページ: 3298-3309
  • DOI: 10.1158/1078-0432.CCR-15-1709
  • 査読あり
• [雑誌論文] Pathological spectrum of bile duct lesions from chronic bile duct injury to invasive cholangiocarcinoma corresponding to bile duct imaging findings of occupational cholangiocarcinoma. (2016)
  • 著者名/発表者名: Kinoshita M, Kubo S, Nakanuma Y, Sato Y, Takemura S, Tanaka S, Hamano G, Ito T, Terajima H, Yamada T, Nakamori S, Arimoto A, Fujikawa M, Sugawara Y, Yamamoto T, Abue M, Nakagawa K, Unno M, Mizuguchi T, Takenaka K, Shirabe K, and Shibata T
  • 雑誌名: J Hepatobiliary Pancreat Sci 巻: 22 ページ: 92-101
  • DOI: 10.1002/jhbp.305
  • 査読あり
• [雑誌論文] Intrahepatic bile ducts are developed through formation of homogeneous continuous luminal network and its dynamic rearrangement. (2016)
  • 著者名/発表者名: Tanimizu N, Kaneko K, Itoh T, Ichinohe N, Ishii M, Mizuguchi T, Hirata K, Miyajima A, and Mitaka T
  • 雑誌名: Hepatology. 巻: 64 ページ: 175-188
  • DOI: 10.1002/hep.28521
  • 査読あり
• [雑誌論文] Pancreatic regeneration: basic research and gene regulation (2016)
  • 著者名/発表者名: Okita K, Mizuguchi T*, Ota S, Ishii M, Nishidate T, Ueki T, Meguro M, Kimura Y, Tanimizu N, Ichinohe N, Torigoe T, Kojima T, Mitaka T, Sato N, Sawada N, and Hirata K
  • 雑誌名: Surg Today 巻: 46 ページ: 633-640
  • DOI: 10.1007/s00595-015-1215-2
  • 査読あり
• [学会発表] 完全腹腔鏡下肝切除術の難易度スコアの変遷と術中出血対応 (2016)
  • 著者名/発表者名: 水口 徹、目黒 誠、沖田 憲司、西舘 敏彦、今村 将史、山口 洋志、伊東 竜哉、河野 剛、信岡 隆幸、木村 康利、竹政伊知朗
  • 学会等名: 第29回 日本内視鏡外科学会総会
  • 発表場所: パシフィコ横浜（神奈川県横浜市）
  • 年月日: 2016-12-08 – 2016-12-10
• [学会発表] 周術期の真菌感染症との付き合い方 (2016)
  • 著者名/発表者名: 水口 徹、目黒 誠、川本雅樹、沖田憲司、信岡隆幸、西舘敏彦、今村将史、伊東竜哉、木村康利、竹政伊知朗
  • 学会等名: 第29回日本外科感染症学会
  • 発表場所: 京王プラザホテル（東京都新宿区）
  • 年月日: 2016-11-30 – 2016-12-01
• [学会発表] 肝離断に関する現時点で考えられる理想的方法と工夫 (2016)
  • 著者名/発表者名: 水口 徹、目黒 誠、今村将史、及能大輔、山口洋志、河野 剛、沖田憲司、西舘敏彦、木村康利、竹政伊知朗
  • 学会等名: 第78回 日本臨床外科学会総会
  • 発表場所: グランドプリンスホテル新高輪 国際館パミール（東京都港区）
  • 年月日: 2016-11-24 – 2016-11-26
• [学会発表] Severe surgical complications after hepatectomy during the last decade. (2016)
  • 著者名/発表者名: Mizuguchi T, Meguro M, Kawamoto M, Ota S, Okita K, Nishidate T, Imamura M, Nobuoka T, Ito T, Kimura Y, Takemasa I
  • 学会等名: 第28回日本肝胆膵外科学会・学術集会
  • 発表場所: 大阪国際会議場（大阪市北区）
  • 年月日: 2016-06-02 – 2016-06-04