| 研究課題/領域番号 |
26461989
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| 研究機関 | 京都府立医科大学 |
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研究代表者 |
市川 大輔 京都府立医科大学, 医学(系)研究科(研究院), 准教授 (20347446)
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| 研究期間 (年度) |
2014-04-01 – 2017-03-31
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| キーワード | 胃癌 / 腹膜播種 / exosome / microRNA |
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| 研究実績の概要 |
中皮細胞株（Met-5A）ならびに胃癌細胞株（KATOⅢ、MKN45、MKN74）の培養液中から超遠心法でexosomeを分離した。中皮細胞・胃癌細胞株の培養液中への同exosomeの添加を行い、exosome顆粒の細胞株内への取り込みを確認した。同様に血管内皮細胞への取り込みも確認した。続いて、中皮細胞ならびに胃癌細胞株の培養液中へのexosome添加の有無による各種機能解析を行った。中皮細胞と各胃癌細胞株との接着能の解析において、各胃癌細胞株由来のexosome添加によって、中皮細胞と胃癌細胞との接着の亢進が確認された。Boyden chamber assay法による癌細胞の遊走・浸潤能の解析でも、胃癌細胞株由来のexosome添加によって浸潤能の亢進を認めたが、中皮細胞株由来のexosome添加では浸潤の亢進は認めなかった。
中皮細胞株へのexosome添加の前後における接着関連分子の変化について、PCR-arrayを用いた解析を行い、分子XならびにYを接着関連分子の候補として選定した。同分子について、exosome添加後のmRNAならびに蛋白レベルでの発現亢進も確認した。同様に胃癌細胞株に対するexosome添加前後のサンプルを用いた、転移・浸潤関連分子に関するPCRアレイも施行したが、発現の変化が各種胃癌細胞株によって異なり、特定の分子を候補とすることは困難であった。
一方、胃癌細胞の中皮細胞への接着能の亢進に関連して、exosomeの添加前後でのmicroRNAの発現変化についてmicroRNA microarrayを用いた解析を行ったが、各細胞株に共通した同関連microRNAの同定には至らなかった。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
胃癌細胞株由来のexosome添加による接着関連分子の探索においては、既に候補分子の同定も行っている。しかしながら、浸潤関連分子については、PCR-arrayの結果が細胞株間で異なっており、今後は各々の細胞株について検討を進める予定である。
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| 今後の研究の推進方策 |
前年度の成果を基に研究を進める予定である。
前述の研究実績の概要で記載した如く、腹膜播種関連microRNAの候補の選定には至らなかったが、胃癌細胞株の中皮細胞への接着に関連してexosomeの添加によって中皮細胞で発現亢進する分子を同定しており、同分子について更に解析を進める予定である。
具体的には、これまで患者の同意の上、採取・保存してきた胃癌患者の腹水中ならびに腹膜細胞中の同接着関連分子XならびにYの発現について解析し、これらの結果と手術時の腹膜播種転移の有無や、術後再発など臨床経過との比較検討を行い、腹膜播種転移の予測バイオマーカーとしての有用性について検討する予定である。
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