| 研究課題/領域番号 |
26462018
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| 研究機関 | 山口大学 |
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研究代表者 |
上野 富雄 山口大学, 医学部附属病院, 講師 (70284255)
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| 研究期間 (年度) |
2014-04-01 – 2017-03-31
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| キーワード | 小腸再生伸長術 / 小腸粘膜下組織 / 小腸再生 / 短腸症候群 |
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| 研究実績の概要 |
ヒトで我々が考案した小腸再生伸長術が可能か否か、ヒト腸間膜に類似したマイクロミニピッグを用い、再生腸管の形態および機能を明確にすることを目的に以下の実験を前年度に引き続き行った。
●小腸腸間膜対側の小腸壁を5.0cm、腸管の長軸方向に切開し、次いで切開部から間膜側小腸壁を、そこに流入する一葉の血管をそれぞれ温存しながら、5.0cm切開し、さらに間膜とともに二葉に分けた。二葉に分けた小腸の口側および肛門側の一端をそれぞれ半周切離した。そこで間膜ごと小腸の一葉を長軸方向にそれぞれずらし、切離した半周の小腸の一端を1.5cm重ねるようにして縫合すると、見かけ上、長さ3.5cm×幅2.0cmの小腸全層欠損部が二か所できる。そこに当面積の再生素材(SIS)を縫着し小腸再生を誘導した。
●6か月後に標本を摘出し、薬物電気生理学的、生化学的および組織学的な検討を、健常小腸および再生小腸に対して行った。In vitroではムスカリン作動薬、NO前駆体および電気刺激に対しての筋収縮・弛緩反応を観察した。健常部および再生部をホモジナイズし、Western blot法にてALPの活性を観察した。抗α-smooth muscle actin抗体および抗desmin抗体にて染色を行い、平滑筋再生の有無と程度を観察した。抗S-100蛋白抗体を用い染色を行い、神経再生の有無と程度を観察した。PAS染色を行い、粘膜の形態を観察した。
その結果、再生部では、ムスカリン作動薬および電気刺激に対し、それぞれ濃度依存性および周波数依存性の収縮波を認めた。またNO前駆体に対しては、濃度依存性の弛緩反応を示した。Western blot法では再生部には、ALPの活性を健常部と同様に認めた。免疫組織化学的観察によると、粘膜面では微絨毛を有した絨毛を認め、またGoblet細胞の再生も認めた。固有筋層には神経再生を伴った平滑筋再生を認めた。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
ヒト腸間膜に形態が類似したマイクロミニピッグに対し、ブタ小腸粘膜下組織を用いて「小腸再生伸長術」を行い、小腸再生における再生小腸壁の形態・機能を引き続き観察できた。
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| 今後の研究の推進方策 |
これまでの結果である、再生部での薬物電気刺激に対する濃度依存性および周波数依存性の収縮波および弛緩波を正常群と比較し、統計学的検討を行う。またWestern blot法でのALPの活性と、免疫組織化学的観察について、再生部および正常部を比較検討し、交付申請書の計画通り、学会にて報告し、論文化する予定である。
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