iNKT細胞のリプログラミングと膵臓癌免疫療法への応用

2014 年度 実施状況報告書

• 研究課題/領域番号: 26462078
• 研究機関: 独立行政法人国立がん研究センター
• 研究代表者: 植村 靖史 独立行政法人国立がん研究センター, 先端医療開発センター, ユニット長 (40364781)
• 研究分担者: 張 エイ 愛知県がんセンター(研究所), その他部局等, その他 (00643719)
• 研究期間 (年度): 2014-04-01 – 2017-03-31
• キーワード: 免疫 / がん / 細胞療法

研究実績の概要

健常人末梢血単核球（PBMC）をα-GalCer 刺激してヒトインバリアントNKT（iNKT）細胞の増殖を誘導した。9-11日後、α-GalCer負荷PBMCで再刺激して、さらに10-12日後Vα24+6B11+CD4+iNKT細胞とVα24+6B11+CD4-iNKT細胞の2つのサブセットを高速自動セルソーター使用して分離した。これらを再刺激する際にリプログラミング因子（Oct3/4, Klf4, Sox2, c-Myc）を導入してiNKT細胞に由来する人工多能性幹細胞（iPSC）を樹立した。Vα24+6B11+CD4+iNKT細胞株とVα24+6B11+CD4-iNKT細胞株では、iPSC誘導効率が著しく異なっていた。安定して樹立されたiNKT由来iPSCをC3H10T1/2フィーダー細胞の上でVEGF存在下7日間培養後、SCFとFlt3Lを添加して造血分化を誘導した。7日後、OP9-DL1上でIL-7とFlt3Lを添加してT細胞への分化を誘導した。この細胞はT細胞様の形態、および表面マーカー発現を有していたが、その後の刺激で充分な増殖が得られなかった。現在、より成熟したiNKT細胞の分化誘導法を検討中である。

現在までの達成度 (区分)

2: おおむね順調に進展している

理由

ヒトNKT細胞には2つの代表的なサブセットが存在するが、それぞれの間でiPSC誘導効率が著しく異なることがわかった。TCR刺激に対する反応性が低かったがiPSCからiNKT細胞様細胞への分化誘導はできたため、おおむね順調と考えられる。

今後の研究の推進方策

より成熟したiNKT細胞を誘導するためのサイトカイン候補が分かりつつある。これらを用いて、より生理的に近いiNKT細胞の誘導を行う予定である。

研究成果

• [雑誌論文] Generation of mouse pluripotent stem cell-derived proliferating myeloid cells as an unlimited source of functional antigen-presenting cells. (2015)
  • 著者名/発表者名: Zhang R., Liu T., Senju S., Haruta M., Hirosawa N., Suzuki M., Tatsumi M., Ueda N., Maki H., Nakatsuka R, Matsuoka Y., Sasaki Y., Tsuzuki S., Nakanishi H., Araki R., Abe M., Akatsuka Y., Sakamoto Y., Sonoda Y., Nishimura Y., Kuzushima K. and Uemura Y.
  • 雑誌名: Cancer Immunol. Res. 巻: Feb11 ページ: 0117.2014
  • DOI: PMID: 25672396
  • 査読あり
• [雑誌論文] Prospectively isolated human bone marrow-derived MSCs support primitive human CD34-negative hematopoietic stem cells. (2015)
  • 著者名/発表者名: Matsuoka Y, Nakatsuka R, Sumide K, Kawamura H, Takahashi M, Fujioka T, Uemura Y, Asano H, Sasaki Y, Inoue M, Ogawa H, Takahashi T, Hino M, Sonoda Y.
  • 雑誌名: Stem Cells 巻: Dec24 ページ: 10.1002.1941
  • DOI: 10.1002/stem.1941.
  • 査読あり
• [雑誌論文] iNKT細胞と樹状細胞の相互作用によるIL-27/osteopontin産生制御 (2014)
  • 著者名/発表者名: 張エイ, 劉天懿, 鈴木元晴, 廣澤成美, 坂本安, 葛島清隆, 植村靖史
  • 雑誌名: 臨床免疫・アレルギー科 巻: 61 ページ: 158-163
• [雑誌論文] iNKT細胞による樹状細胞の機能修飾 (2014)
  • 著者名/発表者名: 張エイ, 鈴木元晴, 上田格弘, 巽美奈子, 劉天懿, 葛島清隆, 植村靖史
  • 雑誌名: 臨床免疫・アレルギー科 巻: 62 ページ: 303-313
• [学会発表] Generation of BCR-ABL reactive CD4 T lymphocytes by reprograming and redifferentiation (2014)
  • 著者名/発表者名: Norihiro Ueda, Yasushi Uemura, Rong Zhang, Tian-Yi Liu, Minako Tatsumi, Yutaka Yasui, Kiyotaka Kuzushima, Hitoshi Kiyoi, Shin Kaneko
  • 学会等名: 第43回日本免疫学会学術集会
  • 発表場所: 国立京都国際会館 京都市
  • 年月日: 2014-12-10 – 2014-12-12
• [学会発表] BCR-ABL–specific T helper cells facilitate propagation of antigen-specific CTLs via DC maturation. (2014)
  • 著者名/発表者名: 上田格弘, 植村靖史, 張エイ, 劉天懿, 巽美奈子, 安井裕, 葛島清隆, 清井仁, 金子新
  • 学会等名: 第76回日本血液学会学術集会
  • 発表場所: 大阪国際会議場 大阪市
  • 年月日: 2014-10-31 – 2014-11-02
• [学会発表] Generation of BCR-ABL reactive CD4 T lymphocytes by reprograming and redifferentiation. (2014)
  • 著者名/発表者名: 上田格弘, 植村靖史, 張エイ, 劉天懿, 巽美奈子, 安井裕, 葛島清隆, 清井仁, 金子新
  • 学会等名: 第73回日本癌学会学術総会
  • 発表場所: パシフィコ横浜 横浜市
  • 年月日: 2014-09-25 – 2014-09-27
• [学会発表] Analysis of glypican-3 specific CTLs in the tumor tissue and vaccination site after administration of GPC3 peptide (2014)
  • 著者名/発表者名: 吉川聡明, 下村真菜美, 澤田雄, 植村靖史, 中面哲也
  • 学会等名: 第73回日本癌学会学術総会
  • 発表場所: パシフィコ横浜 横浜市
  • 年月日: 2014-09-25 – 2014-09-27
• [学会発表] Establishment of three-dimensional primary tumor cell culture method and novel drug sensitivity test (2014)
  • 著者名/発表者名: 下村真菜美, 五字弘, 伊藤学, 植村靖史, 中面哲也
  • 学会等名: 第73回日本癌学会学術総会
  • 発表場所: パシフィコ横浜 横浜市
  • 年月日: 2014-09-25 – 2014-09-27
• [学会発表] The enhancement of the CTL induction by peptide vaccine therapy in combination with anti-CD4 antibody (2014)
  • 著者名/発表者名: Fujinami Norihiro, Yoshikawa Toshiaki, Sawada Yu, Shimomura Manami, Iwama Tatsuaki, Uemura Yasushi, Nakatsura Tetsuya
  • 学会等名: 第73回日本癌学会学術総会
  • 発表場所: パシフィコ横浜 横浜市
  • 年月日: 2014-09-25 – 2014-09-27
• [学会発表] Glypican-3 (GPC3)ペプチドワクチン投与後の投与局所及び腫瘍局所でのペプチド特異的CTLの解析 (2014)
  • 著者名/発表者名: 吉川聡明, 下村真菜美, 澤田雄, 高橋真理, 吉原宏樹, 上野浩生, 真部淳, 細野亜古, 植村靖史, 中面哲也
  • 学会等名: 第18回日本がん免疫学会総会
  • 発表場所: ひめぎんホール 松山市
  • 年月日: 2014-07-30 – 2014-08-01
• [学会発表] BCR-ABL特異的ヘルパーT細胞のリプログラミングとCML治療への応用 (2014)
  • 著者名/発表者名: 上田格弘, 植村靖史, 張エイ, 劉天懿, 巽美奈子, 安井裕, 葛島清隆, 清井仁, 金子新
  • 学会等名: 第18回日本がん免疫学会総会
  • 発表場所: ひめぎんホール 松山市
  • 年月日: 2014-07-30 – 2014-08-01