| 研究課題/領域番号 |
26462169
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| 研究機関 | 名古屋市立大学 |
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研究代表者 |
片野 広之 名古屋市立大学, 医学(系)研究科(研究院), 准教授 (30295612)
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| 研究分担者 |
山田 和雄 名古屋市立大学, 医学(系)研究科(研究院), 教授 (90150341)
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| 研究期間 (年度) |
2014-04-01 – 2017-03-31
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| キーワード | carotid endarterectomy / calcium score / miRNA / microarray / RT-PCR |
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| 研究実績の概要 |
対象とするヒト頸動脈プラークは、頸動脈内膜剥離術によって摘出した標本（摘出後ただちにRNA later処理）を用いた。石灰化含有度の評価は術前MDCTAでのカルシウムスコアで行った。標本を粉砕処理しRNAを抽出、RNeasy lipid tissue mini kit (QIAGEN)を用いて精製、2100 BioanalyzerにてRNA qualityを確認しcDNAを合成、Cyanin 3-CTP、Cyanin 5-CTPでAgilent linear Amplification kits (Agilent)を用いてラベルし、Cy3-sample cRNA および Cy5-reference cRNA をAgilent rat oligo microarrays (～20,000 unique 60 mer oligonucleotides) Agilent hybridization solutionとともに60℃でハイブリダイゼーションさせた。Agilent DNA Microarray Scanner (G2565BA) でアレイをスキャンし Feature Extraction softwareで検出した。高石灰化群 vs 低石灰化群比較においてTGS>50 かつ Log2 >1 かつ FDR< 0.05 となる10miRNA, 個別比較10対から5miRNA, その他4miRNAを抽出した。control small RNA, miRNA3種及びSpike-in2種類を含め24 primer setについてRT-PCR施行中である。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
microarrayを効率よく施行するため試料収集に時間をかけたため。
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| 今後の研究の推進方策 |
RT-PCRの結果にて、高発現のmiRNAについて、さらにPCRにてtarget geneを特定する。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
microarrayを効率よく施行するため試料収集に努め次年度の使用となったため。
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| 次年度使用額の使用計画 |
収集した試料についてmicroarrayおよびRT-PCRを施行しtarget geneを特定していく。
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