| 研究課題/領域番号 |
26462309
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| 研究機関 | 名古屋市立大学 |
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研究代表者 |
永谷 祐子 名古屋市立大学, 医学(系)研究科(研究院), 教授 (90291583)
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| 研究分担者 |
大塚 隆信 名古屋市立大学, 医学(系)研究科(研究院), 教授 (10185316)
浅井 清文 名古屋市立大学, 医学(系)研究科(研究院), 教授 (70212462)
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| 研究期間 (年度) |
2014-04-01 – 2017-03-31
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| キーワード | 関節リウマチ / 滑膜細胞 / グリオスタチン / チミジンホスポリラーゼ / TNF alfa / マトリックスメタロプロテアーゼ |
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| 研究実績の概要 |
関節リウマチの病態にグリオスタチンが密接に関与していることを我々は初めて見いだし報告している。これまでの基礎研究成果に基づき、(1) 関節リウマチにおける関節破壊へのグリオスタチンの関与を解明すること、(2) GLS遺伝子の発現から関節炎惹起活性の発現に至る諸相を阻害することにより、関節リウマチの病勢を緩和する方法を確立することを最終目標としている。本研究では、関節リウマチ滑膜炎寛解のためグリオスタチンが治療のターゲットとなりえることを明らかにすることを目標とした。
本年度は、人工膝関節置換術の際に患者の承諾を得て採取した滑膜を培養し、形態学的に均一な線維芽細胞様滑膜培養細胞(FLSs)を用いた実験を施行した。FLSsにおいてグリオスタチン産生は、TNF-αによって誘導される。さらにグリオスタチンにはautocrine作用があり、これによりRA病態の慢性化、炎症の持続性が生じると考えられる。グリオスタチンによってmatrix metalloproteinases (MMPs)が誘導され、特にMMP-1、MMP-3、 MMP-9の誘導が顕著であった(RT-PCR法)。この誘導作用は、 Sp-1阻害剤にて著明に抑制された。ゼラチンザイモグラフィにてMMP-9の酵素活性も増強されることが明らかとなった。関節リウマチ患者血清中のグリオスタチン濃度を測定した。
TNF阻害薬治療経過において既存の血清病勢マーカー(CPR、赤沈、MMP-3)と比較してその推移を観察している。血清中のグリオスタチン濃度は滑膜炎のvolumeと相関するのではないかと示唆され、さらに症例を集積中である。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
交付申請書にてH27年度では、1. 滑膜細胞でのグリオスタチン産生におけるNF-κBシグナル伝達経路の検討、2. グリオスタチンRNA干渉(GLS siRNA)を用いた関節破壊の抑制、3. グリオスタチン産生阻害因子の検索の3点を目標とした。1.では、滑膜培養細胞でのグリオスタチン産生はTNF-αによって誘導されることからNF- κBシグナル伝達経路の関与が示唆された。そこでNF-κB阻害剤(dexamethasone、aspirinなど)を用いた実験系を構築した。グリオスタチン産生は抑制されたが、さらに詳細に検討するためNF-κB阻害剤の選択を再考すベきと考えた。Cycloheximide前処理をした後TNF-α刺激することによりグリオスタチン mRNAの誘導が完全に押さえられたことから、TNF-αによるグリオスタチン蛋白の誘導には何らかのタンパク質を介していると考えられたが今年度そのタンパク質を同定することはできなかった。2. GLS siRNAによるMMPsの産生抑制効果を判定した。3. グリオスタチン産生阻害因子ついては、今年度にさらに探索の範囲を広げる予定である。
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| 今後の研究の推進方策 |
グリオスタチのプロモーターを組み込んだluciferase assay vectorを作製し、炎症性サイトカイン刺激によるグリオスタチン発現の転写調節活性部位を特定する。予備実験ではSp-１結合部位が重要であることが示唆されている。Sp-１阻害剤の一つであるmithramycinによりluciferase活性が高度に減弱することが確認できている(Ikuta K, et al. Arthritis Res Ther 2012; 14:R87)。より効率よくSp-１を阻害する薬剤をこの系を用いて検索する。近年臨床応用されているJanus kinase阻害剤についての予備実験で、Janus kinase阻害剤がSp-1阻害剤と同等のグリオスタチン抑制効果が得られることを確認した。その効果発現機序も明らかにしたい。
滑膜細胞ではグリオスタチンはautocrine 作用を有する。グリオスタチンautocrine作用の連鎖を断ち切る因子を明らかにすることで、生物学的製剤不応症例の病態抑制に迫れる可能性がある。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
26年度の研究実績を英語論文で発表予定であったが、論文作成が遅れ、次年度に持ち越した。そのため英文校正費と投稿費用をそれぞれ１０万円と８万円と想定し次年度に持ち越した。また各種シグナル伝達阻害剤の購入として約２０万円を想定していたが、一部実験協力者からの供与があったため次年度に持ち越しとなった。
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| 次年度使用額の使用計画 |
次年度使用額については、平成28年6月ロンドンにおける国際学会(Annual European Congress of Rheumatology, 2016.6.8-11)において下記3演題が採択されたため、旅費として使用する予定である。1. The JAK inhibitor (Tofacitinib) inhibits TNF-induced gliostatin/thymidine phosphorylase expression in human fibroblast-like synoviocytes. 2. Sp1 interference prevents joint destruction of RA through inhibitory effects of gliostatin and matrix metalloproteinase-3. 3. Sp1 inhibitor modulates the autocrine action of gliostatin/thymidine phosphorylase (GLS/TYMP) in rheumatoid fibroblast-like synoviocytes.
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