| 研究課題/領域番号 |
26462312
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| 研究機関 | 京都府立医科大学 |
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研究代表者 |
新井 祐志 京都府立医科大学, 医学(系)研究科(研究院), 講師 (50347449)
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| 研究分担者 |
久保 俊一 京都府立医科大学, 医学(系)研究科(研究院), 教授 (20178031)
中川 周士 京都府立医科大学, 医学(系)研究科(研究院), 助教 (30643382)
土田 真嗣 京都府立医科大学, 医学(系)研究科(研究院), 助教 (10719834)
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| 研究期間 (年度) |
2014-04-01 – 2017-03-31
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| キーワード | 変形性関節症 / 低酸素環境 / HIF-1α / HSP70 |
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| 研究実績の概要 |
本研究の目的は，低酸素環境における軟骨細胞のストレス応答機構をanabolicな作用を軸に解析し，OAに対する新たな保存療法の道を開くことである．平成26年度は日本白色家兎の正常軟骨細胞を用いて，1%, 2%，5%，20%の低酸素環境で培養した．また，様々な時間（24，48，72時間）で低酸素環境下培養を行った．HIF-1αおよびHSP70の遺伝子発現をreal-time RT-PCRで，蛋白発現をWestern blottin法で解析した．
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
まず，酸素濃度の影響では，HIF-1αのmRNAの発現は，酸素濃度の低下に従って発現が亢進した．HSP70のmRNAの発現も同様であった．HIF-1αの蛋白発現は，酸素濃度の低下に従って発現が亢進した．HSP70の蛋白発現も同様であった．次に，低酸素環境下での培養時間の影響では，HIF-1αのmRNAの発現は，12時間以降，約7倍有意に上昇し，72時間までほぼ一定の発現を示した．HSP70のmRNAの発現は，12時間で約7倍有意に上昇し，24時間以降で約12倍，72時間までほぼ一定の発現を示した．蛋白発現は，HIF-1αおよびHSP70ともにmRNAの発現と同様の発現動態を示した．
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| 今後の研究の推進方策 |
以上の結果から，今後の培養条件は，酸素濃度1%，24時間が適切であると考える．平成27年度以降は，HIF-1αのchemical inducerやsiRNAを用いて，同様にHIF-1αおよびHSP70のmRNA発現および蛋白発現を解析する予定である．これにより，HIF-1αとHSP70が互いに及ぼす影響が明らかとなると考える．また，HIF-1αおよびHSP70がtype 2 collagenやaggrecanを始めとする軟骨基質蛋白の発現へ与える影響を解析する．
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