| 研究課題/領域番号 |
26462433
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| 研究機関 | 近畿大学 |
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研究代表者 |
デベラスコ マルコ 近畿大学, 医学部, 助教 (20449838)
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| 研究分担者 |
植村 天受 近畿大学, 医学部, 教授 (90213397)
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| 研究期間 (年度) |
2014-04-01 – 2017-03-31
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| キーワード | 前立腺癌 / Cre-LoxPシステム / PTENノックアウトマウス / PTEN/p53 DKO / 動物モデル / PSAコンディショナル |
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| 研究実績の概要 |
PTEN conditional gene targeting (PTEN flox/PSA-Cre) と同じ手法を用い、PTEN+/+/Trp53f/fマウスとPSA-Cre+マウスを交配することにより、PSA-Cre+/Trp53f/fマウスを作製し、我々が確立した♂PSA-Cre+/PTEN homo deletionマウスと交配させ、PSA-Cre+/PTENf/+/Trp53f/+ (PTEN、Trp53ともにヘテロ欠失型）を確立した。その後、ヘテロ型を交配させて、第一目的であるhomo deletionすなわちPSA-Cre+/PTENf/f/Trp53f/fマウスを確立した。組織学的な経時的変化（PINや癌の発生、転移の有無など）をCharacterizeしたところ、易転移性の極めて悪性度の高い前立腺癌モデルであることがわかった。また、各表現型におけるラージスケールによる生存期間の確認と転移臓器の確認（死因）したところ、ダブルノックアウトマウスモデルでは、通常のPSA-Cre+/PTEN homo deletionマウスと比べ12週間以上短い生存期間であり、ヒトにおける第3相試験のようにOSをエンドポイントにおいた治療研究が可能と思われた。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
PSA-Cre+/Trp53f/fマウスを作製し、♂PSA-Cre+/PTEN homo deletionマウスと交配させ、PSA-Cre+/PTENf/+/Trp53f/+ (PTEN、Trp53ともにヘテロ欠失型）を確立し、交配により計画通りPSA-Cre+/PTENf/f/Trp53f/fマウスを作製した。同時に各シグナル分子の発現をチェックすることで、PTEN/p53 DKOマウスモデルを確立したことを確認し得た。また、このPTEN/p53 DKOマウスモデルの有用性についても検することができた。これらは当初、かなり時間を要すると思われたが、大量の動物実験を行うことで達成し得た。メタボロノーム解析についても、ヒューマン・メタボローム・テクノロジーズ株式会社と組織・培養細胞の解析について契約を済ませ、サンプリングを行っている。
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| 今後の研究の推進方策 |
1)本PTEN/p53 DKOマウスモデルを用いた、治療実験（Intervention研究）を行い、腫瘍縮小など近接効果だけでなく、生存曲線を描き、生存期間をプライマリーエンドポイントにした治療実験を行う。
2)培養細胞を確立し、DKOマウスの前立腺癌細胞のCharacterについて分子レベルで検討する。
3)現在計画中のメタボロノーム解析を実行し、結果について検討する。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
昨年度から37万6030円を今年度に持ち越した。ほぼ予定通りの実験を遂行できたが、年度末の発注分や組織のブロック作製費などの支払いが反映されていないために、見かけ上、少額を持ち越した形となった。
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| 次年度使用額の使用計画 |
今年度は本DKOマウスを用いて、ヒトの第3相開発治験に酷似した治療研究を行う予定である。すなわち生存期間をエンドポイントにする治療研究を行い、各種パラメータの統計学的検討を行う。そのため、多くの組織検体について、多くの関連分子の発現解析が必要となり、免疫組織染色だけでなく、タンパク発現量の定量のために大量の抗体に費用が必要となる。加えて、メタボロノーム解析に100万円以上が必要となるため、すべてを使用すると思われる。
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