| 研究課題/領域番号 |
26462437
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| 研究機関 | 山梨大学 |
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研究代表者 |
望月 勉 山梨大学, 総合研究部, 医学研究員 (50377496)
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| 研究期間 (年度) |
2014-04-01 – 2017-03-31
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| キーワード | 排尿生理 / 求心性伝達 / 膀胱上皮 / 膀胱平滑筋 / ＤＲＧ |
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| 研究実績の概要 |
これまでの研究成果としてマウス膀胱上皮細胞は伸展刺激に応答しＡＴＰ放出を行うことが証明された。我々は「蓄尿時の膀胱伸展→膀胱上皮が進展刺激を感知→ＡＴＰ等のmediatorを放出→求心性神経や排尿筋にシグナル伝達」という仮説を建てて、尿意のメカニズムや排尿筋過活動の病態解明に向け精力的に研究を続けている。
１．マウスから膀胱上皮細胞・平滑筋細胞・ＤＲＧ細胞をそれぞれ酵素処理にて単離し、各々培養細胞を樹立。膀胱上皮細胞及びＤＲＧ細胞は初代培養細胞のみをその都度作成し、以後の実験に用いている。膀胱平滑筋細胞については継代が可能なため、cell lineとして使用中である。
２．各種培養細胞に対し形態的ならびに機能的な発現に問題がないか否かを遺伝子レベル･タンパクレベルで再確認。具体的にはＣＫ７（上皮マーカー）･α-SMA（筋性マーカー）･を各々ＲＴ－ＰＣＲ法や免疫染色（蛍光抗体法）でそれらの発現を確認した。
３．ストレッチチャンバー上で膀胱上皮細胞を播種させ、伸展刺激前後のチャンバー内solutionに含まれる物質について高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）で成分解析を行った。
４．現在、培養細胞間のシグナル伝達について、パッチクランプやカルシウムイメージングを用いそれぞれの伝達物質の関与を調べている。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
ＰＣＲや免疫染色などの生化学的実験はほぼ終了しているが、伸展刺激での生理実験データが未だ不十分。昨年までは、各種培養細胞の状態が安定していなかったためであったが、現在は解決。しかしながらノックダウン効果にばらつきがあり、再現性に乏しいため更にデータの蓄積を要す。
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| 今後の研究の推進方策 |
現在、パッチクランプやカルシウムイメージングを用いた生理実験を中心に実験を行っている。予備実験で得られたデータをもとに予想されたmediatorに対しノックダウンや各種inhibitorを適宜用いて、それらの効果につき検証していく。
最終的には上皮から放出された伝達物質のうち、平滑筋やＤＲＧに対してそれぞれ何が最も重要な役割を担っているのかを明らかとする。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
購入予定の物品費等が安価におさえられた為、繰越金が生じた。
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| 次年度使用額の使用計画 |
最終年度は、遅れている実験のデータ解析等で多くの消耗品が必要となる為繰越金で補填する予定である。
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