絨毛性腫瘍に特異的なhCG糖鎖構造をベースにした新規腫瘍マーカーの確立

2016 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 26462520
• 研究機関: 名古屋大学
• 研究代表者: 山本 英子 名古屋大学, 医学系研究科, 准教授 (10432262)
• 研究分担者: 柴田 清住 名古屋大学, 医学系研究科, 准教授 (90335026)
• 研究期間 (年度): 2014-04-01 – 2017-03-31
• キーワード: 絨毛性腫瘍 / hCG / 糖鎖

研究実績の概要

GnT-IVa発現抑制絨毛癌細胞株（GnT-IVa KD）と親株Jarの培養上清を回収し、hCG抗体とJar培養上清をプレート下面接着と反応液とする２方法を行い、GSL-IIレクチン、マウス2次抗体を用いたサンドイッチELISAを行った。いずれにおいても反応は認めなかった。
GnT-III発現抑制を行うため、Murin Stem Cell Virusプロモーター型レンチウイルスベクターを用いてshRNAベクターを3種類作成した。絨毛癌細胞Jarに遺伝子導入、ピューロマイシンにてセレクションを行った細胞をWestern blot法にて発現抑制を確認した。さらにGnT-Va発現過剰絨毛癌細胞株（Jar/GnT-IVa）にGnT-III shRNAベクターを導入し、GnT-IVa過剰発現/GnT-III発現抑制絨毛癌細を樹立した。
絨毛癌細胞株から抽出したタンパクを用いたWestern blot法および免疫沈降法の結果、c-Relとp65が2量体を形成して絨毛癌で機能することが明らかとなった。絨毛癌細胞においてc-Relを発現抑制すると遊走能と浸潤能は低下した。過剰発現株では亢進した。PI3K/Aktシグナル経路を関して浸潤促進することが明らかとなった。
細胞より抽出したタンパクおよび培養上清タンパクを用いたGSL-IIおよびDSAレクチンブロットにより、絨毛癌細胞Jarと比較してJar/GnT-IVa細胞で糖鎖レベルが増加した分子をゲルより抽出し、Nano-LC/MS/MS解析を行った結果、両方の蛋白よりLAMP-2が検出された。絨毛癌細胞および培養上清での発現は免疫沈降およびファックスにて確認し、細胞膜および分泌タンパクとしても存在することを明らかにした。本研究の結果、LAMP-2がGnT-IVaの新たな標的分子であり、絨毛癌細胞より分泌されるタンパクであることも明らかとなった。

研究成果

• [雑誌論文] c-Rel Promotes Invasion of Choriocarcinoma Cells via PI3K/AKT Signaling. Oncology. (2017)
  • 著者名/発表者名: Sekiya Y, Yamamoto E, Niimi K, Nishino K, Nakamura K, Kotani T, Kajiyama H, Shibata K, Kikkawa F.
  • 雑誌名: Oncology 巻: 92 ページ: 299-310
  • DOI: 10.1159/000458529.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Gestational Trophoblastic Neoplasia and Pregnancy Outcome After Routine Second Curettage for Hydatidiform Mole: A Retrospective Observational Study. (2016)
  • 著者名/発表者名: Kan M, Yamamoto E, Niimi K, Tamakoshi K, Sekiya Y, Nishino K, Ino K,Kikkawa F.
  • 雑誌名: Journal of Reproductive Medicine 巻: 61 ページ: 373-379
  • 査読あり
• [雑誌論文] High-dose chemotherapy with autologous peripheral blood stem cell transplantation for choriocarcinoma: A case report and literature review. (2016)
  • 著者名/発表者名: Yamamoto E, Niimi K, Fujikake K, Nishida T, Murata M, Mitsuma A, Ando Y, Kikkawa F.
  • 雑誌名: Molecular Clinical Oncology 巻: 5 ページ: 660-664
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Molecular hydrogen ameliorates several characteristics of preeclampsia in the Reduced Uterine Perfusion Pressure (RUPP) rat model. (2016)
  • 著者名/発表者名: Ushida T, Kotani T, Tsuda H, Imai K, Nakano T, Hirako S, Ito Y, Li H, Mano Y, Wang J, Miki R, Yamamoto E, Iwase A, Bando YK, Hirayama M, Ohno K, Toyokuni S, Kikkawa F.
  • 雑誌名: Free Radical Biology andl Medicine. 巻: 101 ページ: 524-533
  • DOI: 10.1016/j.freeradbiomed.2016.10.491.
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] 血清hCG 100万mIU/ml以上の胞状奇胎の検討 (2016)
  • 著者名/発表者名: 中村謙一, 新美薫, 山本英子, 関谷陽子, 西野公博, 佐藤静香, 菅もも, 藤原多子, 鈴木史朗, 吉川史隆
  • 雑誌名: 東海産科婦人科学会誌 巻: 53 ページ: 213-220
  • 査読あり
• [学会発表] 複数レジメによる化学療法を行った難治性絨毛癌 (2016)
  • 著者名/発表者名: 山本英子
  • 学会等名: 第34回日本絨毛性疾患研究会
  • 発表場所: アバローム紀国（和歌山市湊通丁北）
  • 年月日: 2016-11-25 – 2016-11-25
• [学会発表] 絨毛性腫瘍における絨毛癌診断スコアとFIGO2000リスク分類の比較と治療成績 (2016)
  • 著者名/発表者名: 新美 薫, 山本 英子, 藤原 多子, 佐藤 静香, 中村 謙一, 西野 公博, 関谷 陽子, 吉川 史隆
  • 学会等名: 第58回日本婦人科腫瘍学会学術講演会
  • 発表場所: 米子コンベンションセンター（米子市末広町）
  • 年月日: 2016-07-08 – 2016-07-10
• [学会発表] 2016366823 胞状奇胎除去術施行回数と続発症発症に関する検討 (2016)
  • 著者名/発表者名: 西野 公博, 山本 英子, 中村 謙一, 佐藤 静香, 関谷 陽子, 新美 薫, 吉川 史隆
  • 学会等名: 第58回日本婦人科腫瘍学会学術講演会
  • 発表場所: 米子コンベンションセンター（米子市末広町）
  • 年月日: 2016-07-08 – 2016-07-10
• [学会発表] 絨毛性腫瘍の治療中に生じた肺障害の診断と治療． (2016)
  • 著者名/発表者名: 佐藤静香、新美 薫、山本英子、藤掛佳代、鈴木史朗、中村謙一、西野公博、三輪陽子、吉川史隆．
  • 学会等名: 第68回日本産婦人科学会学術講演会
  • 発表場所: 東京国際フォーラム（東京都千代田区）
  • 年月日: 2016-04-21 – 2016-04-24
• [学会発表] 寛解に至らなかった高齢発症の臨床的絨毛癌の1例 (2016)
  • 著者名/発表者名: 新美 薫, 山本 英子, 藤掛 佳代, 鈴木 史朗, 三輪 陽子, 西野 公博, 中村 謙一, 佐藤 静香, 吉川 史隆
  • 学会等名: 第68回日本産婦人科学会学術講演会
  • 発表場所: 東京国際フォーラム（東京都千代田区）
  • 年月日: 2016-04-21 – 2016-04-24
• [学会発表] 血尿増悪を繰り返した絨毛癌腎転移症例 (2016)
  • 著者名/発表者名: 中村 謙一, 新美 薫, 山本 英子, 藤掛 佳代, 鈴木 史朗, 佐藤 静香, 西野 公博, 三輪 陽子, 吉川 史隆
  • 学会等名: 第68回日本産婦人科学会学術講演会
  • 発表場所: 東京国際フォーラム（東京都千代田区）
  • 年月日: 2016-04-21 – 2016-04-24
• [図書] 産科と婦人科 産婦人科処方実践マニュアル (2016)
  • 著者名/発表者名: 新美 薫、山本 英子、吉川 史隆
  • 総ページ数: 416 (179-181)
  • 出版者: 診断と治療社
• [図書] 医学書院 (2016)
  • 著者名/発表者名: 山本英子
  • 総ページ数: 2192 (1329-1330)
  • 出版者: 今日の治療指針