| 研究課題/領域番号 |
26462692
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| 研究機関 | 高知大学 |
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研究代表者 |
福田 憲 高知大学, 教育研究部医療学系, 准教授 (70335751)
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| 研究分担者 |
松崎 茂展 高知大学, 医歯学系, 准教授 (00190439)
内山 淳平 高知大学, 医歯学系, 助教 (20574619)
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| 研究期間 (年度) |
2014-04-01 – 2017-03-31
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| キーワード | バクテリオファージ / 眼感染症 / 角膜炎 / 眼内炎 / 抗菌薬 / 細菌 / メチシリン耐性黄色ブドウ球菌 |
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| 研究実績の概要 |
今年度はメチシリン耐性黄色ブドウ球菌（MRSA）を用いて、角膜炎および眼内炎の動物モデルにおいてバクテリオファージによる治療効果の検討を行った。MRSA角膜炎モデルは、既報のマウスを用いたモデルにおいては感染が非常に弱く自然治癒するため、治療薬の検討に用いる事は不適切であると考えた。そこで次にウサギ（New Zealand white rabbit）を用いたモデルを検討した。ウサギの角膜上皮を剥離した後、MRSA（500CFU）を角膜実質内に注射することで感染させて作成した。翌日角膜に感染が生じているのを確認した後に、対照、バクテリオファージ、抗菌薬（セフメノキシム）の点眼（1日4回）による治療を開始した。治療開始2日後、安楽死させ角膜を摘出し、角膜内の生菌数を検討した。治療開始後2日後では、対照群および抗菌点眼群に比してバクテリオファージ点眼群が有意に角膜混濁スコアの低下が認められた。角膜内の生菌数は、バクテリオファージ点眼群において減少傾向が見られたが、3群間で統計学的有意差は得られなかった。
またウサギ（New Zealand white rabbit）硝子体内にMRSA（500CFU）を投与することでMRSA眼内炎モデルを生じさせ、翌日に対照、バクテリオファージ、抗菌薬（バンコマイシン）を硝子体投与して治療を行い、治療開始2日後に安楽死させ眼球を摘出した。治療開始後の硝子体液のミエロペルオキシダーゼ活性は3群間で統計学的有意差は見られなかった。治療開始2日後バクテリオファージおよびバンコマイシン投与群は、対照群に比して眼内の生細菌数が低い傾向にあったが、個体差が大きく3群間で統計学的有意差は得られなかった。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
MRSAによる角膜炎と眼内炎のバクテリオファージの治療効果について検討した。
既報のマウスのメチシリン耐性黄色ブドウ球菌（MRSA）角膜炎モデルにおいては、感染後の臨床症状が非常に弱く、自然治癒したため治療効果を判定する実験には不適切と考え、ウサギによる実験系に変更したためモデルの作成に時間を要している。
眼内炎モデルでは、ラットでは硝子体の体積が狭く、注射時に水晶体に接触する可能性が高かったため、ウサギのモデルで検討を行う事とした。
角膜炎および眼内炎モデルともに、感染の個体差が大きいのが実験結果に影響を与えるために感染モデルの改良を重ねている。採取しているサンプルを用いて今後サイトカイン測定や病理学的検討も行う。
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| 今後の研究の推進方策 |
角膜炎および眼内炎モデルともに、感染の個体差が大きい事が課題と考えられた。
角膜炎においては角膜実質内への投与を確実にするために、さらに投与volumeを減らすとともに投与する菌数を増やすなどの検討を行って、個体差の少ないモデルを作成した後に再度バクテリオファージの効果を検討する予定である。
眼内炎モデルにおいても硝子体中に菌の凝集が観察され、硝子体液中の生細菌数の測定に影響を及ぼしている可能性が考えられた。今後水晶体を除去後に前房内に投与するなど、安定して感染が生じるモデル、また術後眼内炎の臨床像により近いモデルなどを作成し、バクテリオファージの効果を抗菌薬と比較検討する予定である。
角膜炎、眼内炎ともに、MRSA以外の菌での検討およびバクテリオファージ由来の溶菌酵素の効果も検討する予定である。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
ウサギのメチシリン耐性黄色ブドウ球菌（MRSA）による眼感染症モデル、およびファージ投与実験系の構築において、菌株、ファージ種、培養条件等について、当初予定より詳細な条件検討が必要であったため、その後の実験に使用予定であった試薬等の一部の購入が、次年度に持ち越されたため。
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| 次年度使用額の使用計画 |
上記実験系を確立し、ウサギの実験的MRSA眼感染症に対するファージおよびファージ由来溶菌酵素の投与実験を行い、それらの投与効果を検討する。
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