| 研究課題/領域番号 |
26462717
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| 研究機関 | 日本大学 |
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研究代表者 |
杉藤 公信 日本大学, 医学部, 助教 (10328750)
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| 研究分担者 |
藤原 恭子 日本大学, 医学部, 助教 (40595708)
越永 從道 日本大学, 医学部, 教授 (70205376)
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| 研究期間 (年度) |
2014-04-01 – 2017-03-31
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| キーワード | 肝芽腫 / 腎芽腫 / DNAメチル化 |
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| 研究実績の概要 |
本年度は、これまで我々が神経芽腫で報告してきた新規腫瘍関連遺伝子について、組織発達段階で変化を認める遺伝子の絞込みを行った。
マウス各発達段階での候補遺伝子におけるDNAメチル化状態および遺伝子発現を解析するために、マウス（C57BL/6）の胎生15日、出生0または1日、12週齢の肝臓・腎臓を3検体ずつ摘出した。各組織からRNAおよびDNAを抽出し、これまで神経芽腫での新規腫瘍関連遺伝子として報告してきた4遺伝子（A～D）について、Real-time PCRによる発現解析およびMassARRAY Epityperによる定量的DNAメチル化解析を行った。
その結果、腎組織では3遺伝子（A、C、D）、肝組織では2遺伝子（C、D）で、発達に伴いその発現とDNAメチル化状態に段階的な変化を認めた。この各遺伝子につき、肝ではヒト小児正常肝組織3検体とヒト肝芽腫細胞株2株（HepG2、Huh6 clone5）間で、腎ではヒト小児正常腎組織3検体とヒト腎芽腫細胞株2株（SK-NEP-1、G401）間で、Real-time PCRにて定量的発現解析を行った。
その結果、肝芽腫細胞株で2遺伝子（C、D）、腎芽腫細胞株で2遺伝子（A、D）が発現に有意な差を認めた。
現在この遺伝子についてMassARRAY Epityperによる定量的DNAメチル化解析を行っている。DNAメチル化に正常組織との差を認めた遺伝子・細胞株につき、随時機能解析を行っていく予定である。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
候補遺伝子に対するマウスおよびヒト検体でのDNAメチル化解析および遺伝子発現解析により、候補遺伝子はさらに絞り込まれた。
ヒト臨床組織検体とヒト肝芽腫および腎芽腫細胞株における定量的DNAメチル化解析は現在解析中であり、比較的早期に解析終了する。今後の遺伝子機能解析を進めるにあたり大きな支障はないと考えられる。
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| 今後の研究の推進方策 |
マウス発達段階およびヒト臨床検体と細胞株を用いた解析で有意差を認めた遺伝子・組織につき、ヒト肝芽腫細胞株またはヒト腎芽腫細胞株を用いた機能解析を行う。候補遺伝子に対してsiRNAによりKnock down細胞株やfull length cDNAを含んだプラスミドベクターを用いた強制発現細胞株による実験系は当施設内で確立されており、候補遺伝子の絞込みが終了次第解析可能である。
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