研究課題
本年度はまず，Bone lining cellsの単離を試みるため，I型コラーゲンプロモーター制御下で蛍光タンパク質Venusを発現するレポーターマウスを使用した。同マウスの頭蓋冠をコラゲナーゼで処理し，得られた頭蓋冠由来細胞（骨原生細胞）の小胞体をER-trackerにて染色した。その後，Venus陽性の細胞について，ER-tracker陽性（骨芽細胞）あるいは陰性（Bone lining cells）の割合をFACSにより分析した。その結果，Bone lining cellsはVenus陽性細胞のうち約3%程度しか存在しないことが明らかとなり，昨年度までの組織学的解析を裏付ける結果となった。このBone lining cellsの細胞数の観点から，細胞集団として単離・解析することは困難と考え，次に，Venus陽性細胞を無作為に選択し，シングルセルRNA-seqにより細胞1個あたりの遺伝子発現を網羅的に解析した。96個の細胞を解析し，90個の細胞について信頼性の高い結果が得られた。全ての細胞はCol1a1/2やIbspなどの骨芽細胞マーカーを発現し，SostやFgf23などの骨細胞マーカーを発現していないことが確認された。さらに，既存の報告では，Bone lining cellsは骨芽細胞と比較すると，Col1a1/2およびBglapの発現低下，CD54（ICAM1）の発現上昇を示すとされており，実際に同様の発現パターンを示す細胞が5個確認された。今後，これらの細胞と骨芽細胞の遺伝子発現パターンを詳細に比較解析し，Bone lining cellsへの運命決定を制御する機構を解明する。
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Proteomics Clinical Applications
巻: 印刷中 ページ: －
10.1002/prca.201600095
Bone Reports
巻: 5 ページ: 280-285
10.1016/j.bonr.2016.09.004
