| 研究実績の概要 |
「分泌タンパク質の生物発光イメージング法」は、微弱な発光を検出することから、レポータータンパク質の効率的な発現による発光量の増大が有効となる。昨年度までの研究成果として、本イメージング法に最も有用であるガウシアルシフェラーゼ（Gaussia lucifease, GLase）について、ヒトで最も使用頻度の高いコドンのみを使用する方法（preferred human codon optimized method, “Preferred 法”）で最適化した遺伝子「pGLuc」を用いることで、骨芽細胞株では通常のコドン最適化法でデザインされた遺伝子（hGLuc）よりも高いGLase発現効率を示すことを明らかにした。さらに、Preferred 法で作製した遺伝子を用いることで、BMP2-GLase融合タンパク質の発現効率を高め、生物発光イメージング像を改善することができた。
本年度は、通常のPreferred法で最適化遺伝子はArtificial open reading frameを持つものの、哺乳類細胞および大腸菌でのGLase発現量に影響が無いことを示し、論文発表を行った。マウスオステオカルシンGLase融合タンパク質（mOC1-GLase）の発現においても、Preferred 法で合成した遺伝子で発現効率を高めることができた。また、インスリンおよびグルカゴン分泌をモデル系として、本イメージング法を3D培養細胞の分泌タンパク質可視化法として確立し、タンパク質分泌における細胞間接着の重要性を示し、論文発表を行った。さらに、各種骨形成関連タンパク質の分泌局在解析を行い、オステオカルシン、I型コラーゲンの基底（Basal）側、BMP-2の上方（Apical）側への極性分泌を示唆した。特にオステオカルシンは、I型コラーゲンやBMP-2と比較して高頻度に分泌が行われることを示唆した。
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