| 研究実績の概要 |
ヒト低分化型舌扁平上皮癌由来細胞株SAS を用いてin vivo selection を8回繰り返し、頸部リンパ節高転移株SAS-LM8を確立した。このSAS-LM8及びSAS-GFPについて、細胞形態、増殖能、遊走能などの生物学的特性に関して評価した。SAS-LM8は、SAS-GFPに比較して、細胞形態は伸張化し、遊走能及び浸潤能の顕著な亢進を認めた。アクチン細胞骨格の形態観察を行った。また、アクチン細胞骨格の再構成に関する低分子量Gタンパク質であるRho family分子（Cdc42, Rac1, RhoA）の活性をウエスタンブロテイングにて解析し、それらの活性化を認めた。両細胞株（SAS-LM8及びSAS-GFP）の転移能・運動能の差に関するWntシグナルの関与を検討した。両細胞株について、蛍光免疫染色と共焦点レーザー顕微鏡によりβ-カテニン,Eカドへリンの細胞内局在の変化を調べた結果、局在変化は認めなかった。β-カテニン標的遺伝子の発現にも差は認めなかった。しかしながら、Wnt関連遺伝子の発現変化を解析した結果、その発現に差が見られた。すなわち、β-カテニン非依存性経路を活性化するWntの1つであるWnt5bの発現の亢進を認めた。さらに、Wnt5bの siRNAによるノックダウンにより、SAS-GFP,SAS-LM8ともに遊走能が低下し、細胞周囲の仮足様突起の減退を認めた。また、Wnt5bを作用させると、SAS-GFP, SAS-LM8ともに運動能の亢進と細胞周囲の仮足様突起およびCdc42,RhoAの亢進を認めた。以上よりWnt5bはWntシグナル伝達経路のうち、β-カテニン非依存性経路を介して、Cdc42とRhoAの活性化、細胞骨格の再構成、に影響を及ぼし、その結果口腔扁平上皮癌細胞の細胞運動能を亢進することが示された。
|
