| 研究課題/領域番号 |
26463055
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| 研究機関 | 朝日大学 |
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研究代表者 |
近藤 信夫 朝日大学, 歯学部, 教授 (40202072)
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| 研究分担者 |
村松 泰徳 朝日大学, 歯学部, 教授 (30247556)
藤内 祝 横浜市立大学, 医学(系)研究科(研究院), 教授 (50172127)
式守 道夫 朝日大学, 歯学部, 教授 (70154193)
光藤 健司 横浜市立大学, 医学部, 准教授 (70303641)
川木 晴美 朝日大学, 歯学部, 講師 (70513670)
高山 英次 朝日大学, 歯学部, 准教授 (70533446)
神谷 真子 朝日大学, 歯学部, 助教 (80181907)
山崎 裕 北海道大学, 歯学研究科(研究院), 教授 (90250464)
本橋 征之 朝日大学, 歯学部, 講師 (80396390)
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| 研究期間 (年度) |
2014-04-01 – 2017-03-31
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| キーワード | 口腔扁平上皮癌 / 間葉系間質細 / 脾細胞 / IFN-γ / ＩＬ-10 |
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| 研究実績の概要 |
OSCC細胞に関連した間葉系間質細胞による刺激脾細胞の免疫制御機構を検討し、癌組織内で免疫抑制に関わる因子を同定するために、組織内の微小環境を模して、OSCC細胞の他に間葉系間質細胞（10T1/2細胞）を、抗CD3抗体刺激した脾細胞と共に混合培養し、上清へ放出されるシグナル因子としてIFN-γ, IL-4, IL-6, IL-10,IL-18をELISA法で検出した。同系マウスOSCC親細胞のSq1979は10T1/2と共存すると抗CD3抗体刺激した脾細胞のIFN-γ産生を10T1/2単独よりも顕著に抑制したが、より悪性度の高いリンパ節転移巣より樹立したクローンL5は10T1/2の免疫抑制能を増強しなかった。さらにトランズウェルを用いた検討で、Sq1979による10T1/2の免疫抑制能の増強には両細胞の細胞接触が必要であることが判明した。一方、抗CD3抗体刺激脾細胞のIL-10産生能は10T1/2との存下で促進し、Sq1979およびL5との共存によりこの効果はさらに増強した。ASCの作用はそれ単独でも既に10T1/2に比べ非常に強く、共培養系でOSCCの作用を検討するには不適切であった。
さらにリンパ節内の微小環境を想定し、10T1/2非存在下でOSCCと抗CD3抗体刺激脾細胞を共培養したところ、Sq1979にくらべL5はIFN-γ産生能を促進し、この促進効果にはL5と脾細胞との細胞接触が必須であった。また刺激脾細胞のIL-4,IL-10産生能はSq1979およびL5との共存により低下し、この作用には細胞接触は必要なかった。これらの系ではIL-6, IL-18は検出限界以下だった。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
当初の計画通り、癌組織内の微小環境を模して、OSCC 細胞の他に間葉系間質細胞を、抗CD3 抗体刺激した脾細胞と共に混合培養し、上清へ放出されるシグナル因子をELISA 法で検出した。シグナル伝達の過程で細胞接触が必要か否か検討するために、様々な細胞の組み合わせでTranswell を用いた非接触混合培養系を作り、免疫制御の変化を検討した。
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| 今後の研究の推進方策 |
発現量に変化が見られた因子の機能を確かめるために、これら因子を吸着したコンディション培地（CM）を調製、あるいはCM を中和抗体処理し、さらに新たなサイトカインを加えるなどして刺激脾細胞と共に混合培養して抑制状態を検討する。
細胞接触によるシグナリングに必要と思われる分子のsiRNA を遺伝子導入して内在性遺伝子発現をノックダウンし、免疫抑制反応の変化を観察する。
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