| 研究課題/領域番号 |
26463117
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| 研究機関 | 北海道医療大学 |
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研究代表者 |
齊藤 正人 北海道医療大学, 歯学部, 教授 (50337036)
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| 研究分担者 |
谷村 明彦 北海道医療大学, 歯学部, 教授 (70217149)
安彦 善裕 北海道医療大学, 歯学部, 教授 (90260819)
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| 研究期間 (年度) |
2014-04-01 – 2017-03-31
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| キーワード | エピジェネティクス / 歯牙発生 |
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| 研究実績の概要 |
エピジェネティクスは、DNAの塩基配列の変化を伴わず遺伝子発現が変化する現象であり、その代表的なものにDNAメチル化やヒストン修飾がある。エピジェネティクスの関与は、疾病だけでなく歯牙の発生や細胞分化の過程において，遺伝子が適切に制御されるために重要な役割を果たしていることが報告されている。本研究では、歯牙発生におけるエピジェネティックな関与を明らかにし、エナメル質の自己修復能力を利用して再石灰化の誘導を行うことを目的とする。
昨年度は、ヒストン脱アセチル化酵素（HDAC）に着目し、HDAC阻害薬（HDACi）である酪酸（NaB）、MS-275、およびバルプロ酸ナトリウム（VPA）を使用し、ラットエナメル上皮細胞における分化および石灰化誘導作用について調査した。
ラットエナメル上皮細胞（SF細胞）にHDACiとしてNaB、MS-275、およびVPAを添加し培養後、SF細胞を用いてアルカリフォスファターゼ活性評価を行った。石灰化誘導能は、SF細胞に比較しすべてのHDACi添加培地に石灰化亢進が認められた。特に、HDAC ClassⅠおよびⅡa選択的阻害薬であるNaBに石灰化の亢進が著明であった。（研究協力者：村田佳織）
HDACi添加培地にて培養した細胞からTotal RNAを抽出し、逆転写後cDNAの合成を行いRT-PCRを行った結果、コントロールであるF-12培地に比較し添加培地では、エナメル質形成関連遺伝子であるamelogeninおよびEnamelinの発現の消失を認めた。また、VPA添加培地では、amelogeninの発現減少およびameloblastinの発現を認め、MS-275では、amelogeninの発現上昇がみられた。（研究協力者：村田佳織、高橋亜友美）
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
次年度の研究予定に昨年度から着手しており、研究データが徐々にそろいつつある。
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| 今後の研究の推進方策 |
①HDACi添加培地におけるCa2+シグナリングの解析
SF細胞にHDACiを添加し、Gap junctionによる細胞間のCa2+シグナリングをG-GECOを使用し可視化する。また、Fura2をレンチウイルスにより細胞導入する事により、蛍光色素と顕微鏡を使ったライブセルイメージングにより，個々の細胞内Ca2+濃度変化を正確に測定する。
②ヒストン修飾の測定
ヒストンにはH2A、H2B、H3、H4の4種類のコアヒストンがあり、それぞれに、リシン残基をはじめとしてアルギニン残基、セリン残基、プロリン残基などでアセチル化、脱アセチル化、メチル化、脱メチル化などがみられる。このような数多くの修飾の中で、本研究ではこれまでの報告からフォーカスを絞って検討する。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
必要試薬の購入において、20,827円では必要試薬購入金額に満たないため次年度繰越金とした。
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| 次年度使用額の使用計画 |
次年度繰越金である20,827円は、研究遂行において必要試薬（物品費）の購入にあてる。
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