2014 年度実施状況報告書

抗体医薬の使用に伴うカンジダ症に対する科学的根拠に基づいた予防法の確立

研究課題

研究課題/領域番号	26463191
研究機関	奥羽大学
研究代表者	清浦有祐奥羽大学, 歯学部, 教授 (90194951)
研究期間 (年度)	2014-04-01 – 2017-03-31
キーワード	Candida albicans / 口腔カンジダ症 / 炎症性サイトカイン / 抗体医薬 / 抗菌ペプチド
研究実績の概要	本研究は、高齢のリウマチ患者への抗体医薬使用による免疫抑制がカンジダ症をおこすメカニズムを口腔カンジダ症マウスモデルによる in vivo 実験によって解明すると共に、新しい抗菌性物質を使用した予防法を確立することを目的とする。本年度は、以下の結果を得た。1. Candida albicans 感染マウスの舌組織において、MIP-1αは非感染マウスと比較して有意に高い産生がみられた。一方、MCP-1は非感染マウスと同様に全く産生がみられなかった。2. 次に、炎症性サイトカインとして作用するIL-1αとTNF-αについても同様に調べた。その結果、非感染マウスと比較して有意に高いIL-1α産生があったが、TNF-α産生は全く認められなかった。3. C. albicans 感染マウスの舌組織によるIL-17の産生は認められたが、非感染マウスと比較して有意差はなかった。
現在までの達成度 (区分)	現在までの達成度 (区分) 2: おおむね順調に進展している理由 C. albicans 感染マウスの舌組織において、非感染マウスと比べ、有意に産生の高いサイトカインが分かったから。
今後の研究の推進方策	炎症性サイトカインに対する抗体(抗IL-6抗体・抗TNF-α抗体)の口腔カンジダ症に対する増悪効果：メス４週令のICRマウスに抗IL-6抗体・抗TNF-α抗体を１日１回 10, 50, 100, 200, 400 μg の投与量で腹腔注射する。投与は 3, 6, 9, 12日間連続しておこなう。それぞれの投与日数経過後に C. albicans 菌液 (2.5×10000000/ml) に浸した綿棒でマウスの口腔内を拭って口腔内に菌を定着させる。感染５日後まで経日的にマウスの頚椎を脱臼させてから、舌と肺を摘出する。マウスは１実験群につき５匹使用する。供試する C. albicans は、申請者が高齢者の口腔内から分離・保存したもので、マウスの実験的口腔カンジダ症を起こすことを確認している。 ①口腔内の C. albicans 菌数のリアルタイムPCRによる測定：口腔内を滅菌生理食塩水に浸した滅菌綿棒で拭い、綿棒を生理食塩水に浸して撹拌させる。その液を使用してリアルタイムPCRをおこなって、C. albicans の菌量を測定する。 ②マウスの口腔内の観察：マウスの口腔内は経日的にデジタルカメラで記録をし、抗体投与による C. albicans の感染増悪の肉眼所見をとる。 ③舌の採取と炎症性サイトカインの測定：すでに予備実験の結果から、抗IL-6抗体投与マウスでは舌表面に定着する C. albicans の菌数が増加することを認めている。そこで、C. albicans を口腔内に感染させた後は経日的に舌を採取して、ケモカインを含む炎症性サイトカイン (MIP-1α, IL-1, IL-6) の産生量をELISA法で測定する。
次年度使用額が生じた理由	多数のマウスを継続して使用したいので、平成26年度の助成金を残した。
次年度使用額の使用計画	主に、マウス、ELISAキットおよび抗体の購入に使用する。