| 研究課題/領域番号 |
26550029
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| 研究機関 | 鳥取大学 |
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研究代表者 |
栗政 明弘 鳥取大学, 医学(系)研究科(研究院), 准教授 (80343276)
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| 研究期間 (年度) |
2014-04-01 – 2017-03-31
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| キーワード | DNA損傷応答 / 網膜神経節細胞 / 生細胞 / 組織 / フォーカス形成 / DNA損傷 / 神経 |
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| 研究実績の概要 |
本年度は、EGFP-53BP1マウスのトランスジェニックマウスの純系統の作成を試みてきたが、次第に繁殖力が低下し、十分なマウスが得られなくなった。導入した遺伝子のホモ化による影響と考えられる。この系統での純化の影響を回避するため、c57BL/6とバッククロスを行い、c57BL6系統のマウス作成を継続している。また、網膜神経節細胞(RGC細胞)の単離と分散培養法を確立するために、パニング法を用いたRGC細胞培養法の条件検討を行った。これまでのラット神経節細胞培養法をマウスへ応用したが、ラットで用いる抗体がマウスでは十分に機能せずに、ラットほど純粋なRGC細胞の単離ができなかった。最終的には、Thy－１抗体による分離を諦め、多少非RGC細胞を含む条件下でのRGC細胞の培養には成功することができた。このマウスRGC細胞に対して、放射線類似のDNA損傷を誘導するネオカルシノスタチンを用いたところ、EGFP-53BP1のフォーカス形成は、通常の培養細胞に認められるものより、かなり遅れてフォーカス形成がなされていることが予想された。このことは、RGC細胞のように高度に分化した細胞では、DNA損傷に伴うフォーカス形成が培養細胞などの増殖細胞とは異なることが考えられた。今後さらに実験を繰り返し、増殖する細胞と分化した細胞との違いを明らかにし、組織におけるDNA損傷応答のメカニズムの違いを明らかにしていく予定である。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
網膜神経節細胞の培養法が、これまでにラットで確立されていた方法がマウスではうまく作動しないことが明らかになった。そのために、かなりの試行錯誤の時間を取られ、目標とした網膜神経節細胞の培養が確立できなかった。Thy-1抗体を使わない方法で、代替となる方法を試みて、未だ不純物となる細胞は含まれるが、RGC細胞の観察は可能となった。今後、同じ条件で実験を続けるとともに、別の抗体を用いることでさらに改善できるかの検討が必要と考えられる。また、マウスの繁殖が非常に遅くなった問題に関しては、現在バッククロスにより改善傾向が認められるが、未だ十分なマウスの数が得られていない。これも今後改良を試みていく。
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| 今後の研究の推進方策 |
マウスの系統の問題を回避するためのバッククロスを継続するとともに、マウス網膜神経節細胞の分離の効率化を目指していく。十分なマウスRGC細胞が得られるようになったのちに、マウス緑内障発症モデルでの実験に移行していく予定である。それまでに、さらに培養系でのRGC細胞での放射線影響やストレス影響の評価も継続して行っていく。研究代表者の所属が、新しい大学に移ったため、現在実験環境が未だ整備されておらず、研究が遅れる可能性が高い。次年度に持ち越す可能性も検討中である。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
研究代表者の異動があり、すべての金額を使用できなかった。
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| 次年度使用額の使用計画 |
消耗品費等で使用していく。
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