色素性乾皮症A群患者における進行性神経障害の機構解析

2014 年度 実施状況報告書

• 研究課題/領域番号: 26550042
• 研究機関: 奈良県立医科大学
• 研究代表者: 森 俊雄 奈良県立医科大学, 医学部, 研究教授 (10115280)
• 研究期間 (年度): 2014-04-01 – 2017-03-31
• キーワード: 酸化的DNA損傷 / サイクロプリン / 色素性乾皮症 / 神経障害 / 酵素標識免疫法 / ヌクレオチド除去修復 / 活性酸素

研究実績の概要

色素性乾皮症A群(XP-A)患者に発症する進行性神経障害が酸化的DNA損傷サイクロプリンの蓄積による神経細胞死と関連するかを検討するため、同損傷に特異的結合を示すモノクローナル抗体(CdA-1)を世界で初めて作製した。性格付け実験の結果、CdA-1抗体はDNA中の8,5'-cyclo-2'-deoxyadenosine (cyclo-dA)に特異的に結合することがわかった。また、同抗体を用いた酵素標識免疫法により、オリゴヌクレオチド中のcyclo-dA量とそれらに対する抗体結合量の間に直線関係が成立することがわかった。さらに、窒素下でのX線照射やフェントン反応処理によりDNA中に効率よくcyclo-dAが誘発されることを免疫学的定量測定法で明らかにした。加えて、蛍光免疫染色法により、cyclo-dA含有オリゴヌクレオチドを導入したヒト骨肉腫細胞においてcyclo-dAを可視化することにも成功した。
以上のように、翌年度からのXP-A患者やXP-Aマウスの組織を用いた本格実験に向けた基本技術が完成した。

現在までの達成度 (区分)

2: おおむね順調に進展している

理由

ほぼ計画通りに進展しているため。

今後の研究の推進方策

研究計画に基づき、XP-A患者やXP-Aマウスの組織中のcyclo-dAを定量測定する。

研究成果

• [雑誌論文] Functional regulation of the DNA damage-recognition factor DDB2 by ubiquitination and interaction with xeroderma pigmentosum group C protein. (2015)
  • 著者名/発表者名: S. Matsumoto, E.S. Fischer, T. Yasuda, N. Dohmae, S. Iwai, T. Mori, R. Nishi, K. Yoshino, W. Sakai, F. Hanaoka, N.H. Thoma, and K. Sugasawa.
  • 雑誌名: Nucleic Acids Res. 巻: 43 ページ: 1700-1713
  • DOI: 10.1093/nar/gkv038
  • 査読あり / オープンアクセス / 国際共著 / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Quantitative and in situ detection of oxidatively generated DNA damage 8,5’-cyclo-2’-deoxyadenosine using an immunoassay with a novel monoclonal antibody. (2014)
  • 著者名/発表者名: T. Iwamoto, P.J. Brooks, T. Nishiwaki, K. Nishimura, N. Kobayashi, S. Sugiura and T. Mori.
  • 雑誌名: Photochem. Photobiol. 巻: 90 ページ: 829-836
  • DOI: 10.1111/php.12239
  • 査読あり / 謝辞記載あり
• [学会発表] 新規モノクローナル抗体を用いた酸化的DNA損傷サイクロプリンの定量測定と可視化 (2014)
  • 著者名/発表者名: 森 俊雄、岩本顕聡、小林信彦、杉浦重樹
  • 学会等名: 日本放射線影響学会第57回大会
  • 発表場所: 鹿児島
  • 年月日: 2014-10-01 – 2014-10-03
• [学会発表] Quantitative and in situ detection of oxidatively generated DNA damage 8,5’-cyclo-2’-deoxyadenosine using an immunoassay with a novel monoclonal antibody (2014)
  • 著者名/発表者名: T. Iwamoto, P.J. Brooks, N. Kobayashi, S. Sugiura and T. Mori
  • 学会等名: 16th International Congress on Photobiology
  • 発表場所: Cordoba, Argentina
  • 年月日: 2014-09-08 – 2014-09-12
• [学会発表] 新規モノクローナル抗体を用いた酸化的DNA損傷サイクロプリンの定量測定と可視化 (2014)
  • 著者名/発表者名: 岩本顕聡、P.J. Brooks、小林信彦、杉浦重樹、森 俊雄
  • 学会等名: 第36回日本光医学・光生物学会
  • 発表場所: 大阪
  • 年月日: 2014-07-25 – 2014-07-26
• [備考] 奈良県立医科大学ラジオアイソトープ(RI)実験施設
  • URL: http://www.naramed-u.ac.jp/university/kenkyu-sangakukan/radioisotope/radioisotope.html