| 研究実績の概要 |
申請者は、肝機能をはじめとする肝特異的な遺伝子発現に関与することがわかっている転写因子のうち、HNF-1α, HNF-1β, HNF-3β, HNF-4α, HNF-6, C/EBP-α, C/EBP-β, C/EBP-γの８種類の肝特異的転写因子の遺伝子を誘導発現システムであるTet-Onシステムによる発現ユニットとしてマウスヘパトーマHepa1-6細胞にレトロウイルスベクターで導入し、誘導薬剤であるドキシサイクリン（Dox）添加によって導入した転写因子遺伝子を発現させることで、高い肝機能を発揮する状態に誘導できる細胞株（Hepa/8F5）の樹立に成功している。これまでに、Hepa/8F5細胞における肝機能誘導は、導入した転写因子の発現に依存しており、８種類全ての転写因子の発現が高肝機能の誘導に必須であることがわかっている。この細胞では、Dox添加によって細胞増殖の停止とともに高肝機能が発揮されるが、Doxを抜くと肝機能が徐々に低下してしまうため、長期にわたって高肝機能を維持するためにはDoxを入れ続けるか、間欠的に添加する必要がある。本研究では、BALシステムに利用するために、導入遺伝子の発現誘導後は、Dox添加がなくても高肝機能を継続する細胞の樹立を試みた。Hepa/8F5細胞にDoxの一過的な添加で導入遺伝子の継続発現が可能とするための遺伝子発現ユニットを導入することで目的とする細胞の取得に成功した。今後は、この細胞の肝機能発現のレベルや長期維持について検討する予定である。さらに、Doxといった薬剤添加ではなく熱ショック誘導型システムによって肝機能誘導できるヘパトーマ細胞の樹立に関しても検討を開始しており、今年度は、ヘパトーマ細胞に熱ショック誘導型トランスアクチベーター発現ユニットを導入した細胞を作製した。
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