研究課題
多重選択に用いるための、新しいトランスジェニックマウス(orexin-Flp)マウスを作成した。オレキシン神経特異的にフリッパーゼ(Flp)を発現しており、Creと異なるFRT配列を認識するために、Creと同時に多重選択に用いることが可能となる。Flpの活性とFlpのオレキシン神経特異的な発現を確認するために、orexin-Flpマウスを蛍光レポーターマウスROSA-loxP-stop-loxP-mTFPマウスと交配させた。免疫組織化学的解析の結果、オレキシン神経だけでmTFPの緑色蛍光が認められた。これらの結果は、オレキシン神経だけでFlpが発現しており、また機能していることを示している。そこで、次にorexin-Flpマウスをメラニン凝集ホルモン(MCH)-Creマウスと交配させ、orexin-Flp; MCH-Creマウスを作成した。MCH神経はオレキシン神経の近傍にあり、ウイルスベクターを用いた方法では、通常この2つの神経群に別々の遺伝子を発現させることは不可能である。Flp依存的に緑色蛍光タンパク質を発現するアデノ随伴ウイルスベクター(AAV)と、Cre依存的に赤色蛍光タンパク質を発現するAAVをorexin-Flp; MCH-Creマウスの視床下部に局所感染させて遺伝子を発現させた。その結果、オレキシン神経には緑色蛍光が、MCH神経には赤色蛍光が認められ、両者は全く一致しなかった。これらのことは、FlpとCreを用いて近傍の細胞に別々の遺伝子を発現させることに成功したことを示している（2重選択）。同様にorexin-Flpマウスを、GABA作動性神経特異的にCreを発現するマウスや、コルチコトロピン遊離因子(CRF)神経特異的にCreを発現するマウスと交配させて、同様にそれぞれの細胞種に異なる遺伝子の発現に成功した。また、光遺伝学を適用するためにチャネルロドプシン2を発現するAAVを用いて特定神経への遺伝子発現と、光による神経活動操作も達成した。
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