早老症候群霊長類モデルの開発

2015 年度 実施状況報告書

• 研究課題/領域番号: 26640053
• 研究機関: 滋賀医科大学
• 研究代表者: 伊藤 靖 滋賀医科大学, 医学部, 准教授 (90324566)
• 研究分担者: 土屋 英明 滋賀医科大学, 動物生命科学研究センター, 技術専門職員 (10378440) ; 佐々木 えりか 公益財団法人実験動物中央研究所, 応用発生学研究センター, センター長 (70390739) ; 依馬 正次 滋賀医科大学, 動物生命科学研究センター, 教授 (60359578) ; 小笠原 一誠 滋賀医科大学, 医学部, 教授 (20169163)
• 研究期間 (年度): 2014-04-01 – 2017-03-31
• キーワード: 老化 / 癌 / トランスレーショナルリサーチ / 病理学 / 霊長類モデル / レンチウイルスベクター / ゲノム編集

研究実績の概要

カニクイザルのWerner RecQ DNAヘリカーゼをゲノム編集により改変するために、CRISPR/Cas9システム用プラスミドにカニクイザルWerner RecQ DNAヘリカーゼ遺伝子を組み換えた。これによりguide RNAとCas9を発現するベクターを作製した。このベクターをカニクイザル細胞にトランスフェクトし、Werner RecQ DNAヘリカーゼ遺伝子の塩基配列を調べたところ、塩基の欠失、置換が起きていることが確認された。
カニクイザル受精卵に遺伝子を導入する予備実験として、カニクイザルメスにホルモンを投与し、排卵を誘発した。この卵細胞に顕微鏡下で精子を注入し、さらにGFPを発現可能な遺伝子を含むレンチウイルスベクターを感染させた。受精卵を仮親に移植したところ、妊娠が成立し、出産に至った。出生したサルは全身にGFPを発現し、遺伝子の導入の成功が確認された。

現在までの達成度 (区分)

2: おおむね順調に進展している

理由

レンチウイルスベクターのカニクイザル受精卵への導入、胚移植、妊娠出産に成功した。

今後の研究の推進方策

今年度はCRISPR/Cas9を用いたWerner RecQ DNAヘリカーゼ遺伝子のゲノム編集をカニクイザル受精卵で行う。また、試験管内で、Werner RecQ DNAヘリカーゼ遺伝子を改変した細胞の機能の変化を測定する。

研究成果

• [雑誌論文] Generation of transgenic cynomolgus monkeys that express green fluorescent protein throughout the whole body (2016)
  • 著者名/発表者名: Seita Y, Tsukiyama T, Iwatani C, Tsuchiya H, Matsushita J, Azami T, Okahara J, Nakamura S, Hayashi Y, Hitoshi S, Itoh Y, Imamura T, Nishimura M, Tooyama I, Miyoshi H, Saitou M, Ogasawara K, Sasaki E, Ema M
  • 雑誌名: Scientific Reports 巻: 2 ページ: 24868
  • DOI: 10.1038/srep24868.
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Comparison of pathogenicities of H7 avian influenza viruses via intranasal and conjunctival inoculation in cynomolgus macaques (2016)
  • 著者名/発表者名: Shichnohe S, Itoh Y, Nakayama M, Ozaki H, Soda K, Ishigaki H, Okamatsu M, Sakoda Y, Kida H, Ogasawara K
  • 雑誌名: Virology 巻: 493 ページ: 31-38
  • DOI: 10.1016/j.virol.2016.03.007
  • 査読あり
• [雑誌論文] Translational research on influenza virus infection using a nonhuman primate model (2016)
  • 著者名/発表者名: Itoh Y
  • 雑誌名: Pathology International 巻: 66 ページ: 132-141
  • DOI: 10.1111/pin.12385
  • 査読あり
• [備考] 本研究室より発表した論文の紹介
  • URL: http://www.shiga-med.ac.jp/~hqpatho2/journal_club.html