乳癌臨床検体の初代スフェア培養系を用いた癌根治のための変異診断システムの構築

2014 年度 実施状況報告書

• 研究課題/領域番号: 26640072
• 研究機関: 金沢大学
• 研究代表者: 後藤 典子 金沢大学, がん進展制御研究所, 教授 (10251448)
• 研究分担者: 鈴木 穣 東京大学, 新領域創成科学研究科, 教授 (40323646) ; 中田 飛鳥 金沢大学, がん進展制御研究所, 助教 (70597921)
• 研究期間 (年度): 2014-04-01 – 2016-03-31
• キーワード: がん幹細胞 / 乳がん / スフィア培養 / PDXモデル / RNAシーケンス / エキソームシーケンス

研究実績の概要

本年度は、ルミナルタイプA２例, ルミナルタイプB２例、トリプルネガティブタイプ１例について、解析を行った。それぞれスフィア培養と接着培養を行ったのちに核酸を抽出し、次世代シーケンサーを使ったRNAシーケンスならびにエキソームシーケンスを行った。その後のバイオインフォマティクス解析については、ルミナルタイプA　1例、ルミナルタイプB　1例、トリプルネガティブタイプ　1例について、完了した。それぞれ、スフィア培養もしくは接着培養特異的な変異、いずれにも共通した変異が数十個ずつ同定された。それらについて、prognoscanを使って、乳がんの遺伝子発現プロファイルを解析し、発現が高い患者の予後が悪い遺伝子で、さらにoncomineを用いて解析を行い、がん組織により発現の高い遺伝子を絞り込んだ。MCM10遺伝子に注目して、解析をはじめた。MCM10遺伝子をsiRNAにてノックダウンさせると、乳がんスフィアの形成が悪くなり、がん幹細胞機能に重要であることが示唆された。
月に２検体ほどのペースで乳がんの手術検体をいただき、培養を行っている。トリプルネガティブがんの培養並びにPDXも作製できた。

現在までの達成度 (区分)

2: おおむね順調に進展している

理由

すでに５検体の次世代シーケンサーを用いた解析を行い、３検体についてはバイオインフォマティクス解析も完了しており、予定通り進んでいる。
臨床検体培養細胞ならびにPDXのカタログ化については、これまで足りなかったトリプルネガティブ検体も収集でき、順調である。また、候補のドライバー遺伝子もみつかっている。

今後の研究の推進方策

次世代シーケンサーを用いた解析をより多くの臨床検体培養細胞を用いて行う。臨床検体培養細胞ならびにPDXのカタログ化をさらに進める。
候補のドライバー変異をふやし、創薬と効果判定診断薬の可能性を探って行く。

次年度使用額が生じた理由

課題研究における研究分担者との研究打合せ及び学会での情報収集が、来年度多く見込まれるため、予算の一部を次年度に使用することにした。

次年度使用額の使用計画

研究打合せ出張旅費及び学会出張旅費

研究成果

• [雑誌論文] The ordered acquisition of Class II and Class I mutations directs formation of human t(8;21) acute myelogenous leukemia stem cell. (2014)
  • 著者名/発表者名: Shima T, Miyamoto T, Kikushige Y, Yoda J, Tochigi T, Yoshimoto G, Kato K, Takenaka K, Iwasaki H, Mizuno S, Goto N, Akashi K.
  • 雑誌名: Exp Hematol 巻: 42 ページ: 955-965
  • DOI: 10.1016/j.exphem.2014.07.267.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Role of pyruvate kinase M2 in transcriptional regulation leading to epithelial-mesenchymal transition. (2014)
  • 著者名/発表者名: Hamabe A, Konno M, Tanuma N, Shima H, Tsunekuni K, Kawamoto K, Nishida N, Koseki J, Mimori K, Gotoh N, Yamamoto H, Doki Y, Mori M, Ishii H.
  • 雑誌名: Proc. Natl. Acad. Sci., USA 巻: 111 ページ: 15526-15531
  • DOI: 10.1073/pnas.1407717111
  • 査読あり
• [雑誌論文] MicroRNA-1246 expression associated with CCNG2-mediated chemoresistance and stemness in pancreatic cancer. (2014)
  • 著者名/発表者名: Hasegawa S, Eguchi H, Nagano H, Konno M, Tomimaru Y, Wada H, Hama N, Kawamoto K, Kobayashi S, Nishida N, Koseki J, Nishimura T, Gotoh N, Ohno S, Yabuta N, Nojima H, Mori M, Doki Y, Ishii H.
  • 雑誌名: Br J Cancer 巻: 111 ページ: 1572-1580
  • DOI: 10.1038/bjc.2014.454
  • 査読あり
• [雑誌論文] Epiregulin enhances tumorigenicity activating ERK/MAPK pathway in glioblastoma. (2014)
  • 著者名/発表者名: Kohsaka S, Hinohara K, Wang L, Nishimura T, Urushido M, Yachi K, Tsuda M, Tanino M, Kimura T, Nishihara H, Gotoh N, Tanaka S.
  • 雑誌名: Neuro. Oncol. 巻: 16 ページ: 960-970
  • 査読あり
• [雑誌論文] Fgfr1-Frs2/3 Signalling Maintains Sensory Progenitors during Inner Ear Hair Cell Formation. (2014)
  • 著者名/発表者名: Ono K, Kita T, Sato S, O’Neill P, Mak S-S., Paschaki M, It, M, Gotoh, N, Kawakami K, Ladher RK.
  • 雑誌名: PLOS Genetics. 巻: 10 ページ: e1004118
  • DOI: 10.1371/journal.pgen.1004118.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Frs2alpha and Shp2 signal independently of Gab to mediate FGF signaling in lens development. (2014)
  • 著者名/発表者名: Li H, Ta, C, Cai Z., Hertzler-Schaefer K, Collins TN, Wang F, Feng G-S, Gotoh N, Zhang X.
  • 雑誌名: J. Cell Sci. 巻: 127 ページ: 571-582
  • DOI: DOI: 10.1242/jcs.134478.
  • 査読あり
• [学会発表] がん幹細胞研究の新展開：多様性と可塑性 (2014)
  • 著者名/発表者名: 後藤典子
  • 学会等名: 第37回日本分子生物学会
  • 発表場所: パシフィコ横浜 （横浜）
  • 年月日: 2014-11-27
  • 招待講演
• [学会発表] 乳がん幹細胞を標的とした治療戦略 (2014)
  • 著者名/発表者名: 後藤典子
  • 学会等名: 第73回日本癌学会学術総会 腫瘍別シンポジウム
  • 発表場所: パシフィコ横浜 （横浜）
  • 年月日: 2014-09-25
  • 招待講演
• [学会発表] Insulin-like growth factor regulates breast cancer stem cell properties (2014)
  • 著者名/発表者名: Gotoh N.
  • 学会等名: 2014 SUNCRI Cancer Symposium,
  • 発表場所: 華城市（韓国）
  • 年月日: 2014-04-15
  • 招待講演