研究課題/領域番号 |
26640076
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研究機関 | 京都大学 |
研究代表者 |
越山 雅文 京都大学, 医学(系)研究科(研究院), 講師 (50724390)
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研究分担者 |
松村 謙臣 京都大学, 医学(系)研究科(研究院), 准教授 (20452336)
馬場 長 京都大学, 医学(系)研究科(研究院), 講師 (60508240)
小西 郁生 京都大学, 医学(系)研究科(研究院), 教授 (90192062)
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研究期間 (年度) |
2014-04-01 – 2016-03-31
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キーワード | 癌幹細胞 / SP分画 / 卵巣漿液性腺癌 / shRNA / single clonogeneisity / chemosennsitivity / sphere formation / shRNAライブラリー |
研究実績の概要 |
shRNAライブラリーを使用してSide population (SP)分画を指標とした機能的スクリーニングを元々SP分画の無い2つの卵巣漿液性腺癌(CH1, SKOV3)細胞を用いて行った。1次スクリーニングでSP分画を生み出しうるshRNAを、それぞれの細胞株で100個程度見出した。それらを1つずつ導入して再現性を確認し(2次スクリーニング)、標的遺伝子のmRNA発現をRT-PCRにて確認し、さらに同じ遺伝子を標的とする複数の新たなshRNAを導入し、確かにその発現の低下がSP分画を生み出す遺伝子を、それぞれの細胞株で3つずつ、計6つ同定することができた。 産み出されたSP分画に癌幹細胞(Cancer stem cell:CSC)性質がみられるか、in vitroにおけるsingle clonogenesity chemosensitivity、spere formation assayを行い、in vivoでもNOD/Scidマウスに接種しての腫瘍形成能を評価した。その結果、全ての遺伝子発現低下により産まれたSP分画に、CSC性質が伴う事を確認できた。
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