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2015 年度 実績報告書

がん細胞由来エキソソームを特異的に識別する核酸アプタマーの単離とその診断への応用

研究課題

研究課題/領域番号 26640097
研究機関国立研究開発法人産業技術総合研究所

研究代表者

宮岸 真  国立研究開発法人産業技術総合研究所, バイオメディカル研究部門, 研究グループ長 (30323538)

研究期間 (年度) 2014-04-01 – 2016-03-31
キーワード核酸アプタマー / エキソソーム
研究実績の概要

エキソソームは細胞が放出する30nm-100nmの小胞であり、細胞由来のmiRNAやmRNAを含んでいることから、がんや様々な疾患の診断への臨床応用に期待が集まっている。本研究課題では、肺がん細胞、大腸がん細胞、乳がん細胞を用い、カウンターセレックス法により、それぞれの癌細胞由来のエキソソームを識別する核酸アプタマーの取得を目的とした研究を行った。
初年度においては、それぞれの細胞株から大量にエキソソームを調整を行うと共に、エキソソームの精製法について検討を行った。その結果、限外ろ過(100kDa)の精製を行い、その後にInvitrogen社のエキソソーム精製キットを用いる方法が、精製度が高く、収率も高いという結果が得られた。さらにネガティブセレクションの条件をEGFRに対するアプタマーとEGFRポジティブおよびEGFRネガティブのエキソソームを用い検討を行った。
最終年度においては、それぞれの癌細胞由来のエキソソームを用いて、特異的なアプタマーの取得を試みた。ニトロセルロースフィルターを用いたこれまでのセレクション法により、アプタマーの取得を試みた。数回の実験を行ったが、次世代シークエンサーによる解析、および結合実験から、エキソソームを認識するアプタマーを得ることができないことが分かった。そこで、効率を上げるために、エキソソームを認識するCD68抗体を結合する磁気ビーズを用いたセレクション法の検討を行い、アプタマーの取得を試みた。その結果、数種類の大腸がん細胞由来エキソソームを認識するアプタマーを取得することができた。今後、その親和性、および、他のがん由来のエキソソームに対する結合に関して確認していく予定である。

  • 研究成果

    (1件)

すべて 2016

すべて 学会発表 (1件)

  • [学会発表] 核酸アプタマーを用いたエキソソームの精製法の検討2016

    • 著者名/発表者名
      猪股 梨華、Zhao Jing、宮岸 真
    • 学会等名
      LS-BT合同研究発表会
    • 発表場所
      つくば
    • 年月日
      2016-02-01

URL: 

公開日: 2017-01-06  

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