コムギ無細胞産生抗原を用いたサメナノボディ作成の基盤技術開発

2014 年度 実施状況報告書

• 研究課題/領域番号: 26640130
• 研究機関: 愛媛大学
• 研究代表者: 澤崎 達也 愛媛大学, プロテオサイエンスセンター, 教授 (50314969)
• 研究期間 (年度): 2014-04-01 – 2016-03-31
• キーワード: ナノボディ / サメ / 抗体 / 無細胞タンパク質合成

研究実績の概要

I．サメに適した抗原免疫条件の確立
１）抗サメナノボディFc領域抗体の作成：本年度は、生きたドチザメを捕獲することができなかったため、ｍRNAが入手できず、Fc領域遺伝子のクローニングができなかった。そこで人工遺伝子としてFc領域遺伝子のデザインを行った。現在、タンパク質合成に必要なコムギ無細胞タンパク質合成用のベクターへクローニング中である。タンパク質発現後は、マウスへ免疫して抗サメナノボディFc領域抗体の作成を行う。　２）至適抗原量の決定：ドチザメ捕獲が上手く行かず、抗原の至適化は試みることができなかった。　３）構造認識型サメナノボディ検出系の確立：本申請者は、ビオチン化リポソームとアルファースクリーニング法を組み合わせることにより、膜タンパク質の3次元構造を認識する抗体を選別する技術を開発してきた（投稿中）。抗ドチザメナノボディFc抗体が取得できていないため、サメナノボディのモデル実験として、一本鎖抗体を用いてアルファースクリーン法によるビオチン化タンパク質を認識できる系の構築を行った。

現在までの達成度 (区分)

3: やや遅れている

理由

本年度は海水温の変化のためか、生きたドチザメの捕獲ができなかったため、ドチザメを用いた実験が実施できなかった。しかし、サメナノボディのモデルとして一本鎖抗体を用いて抗体選抜系の確立には成功した。

今後の研究の推進方策

愛媛県水産試験場と協力して、ある程度の数のドチザメの捕獲を行う。また、希望通りのドチザメ確保が難しい場合を想定して、ドチザメ抗体のライブラリーを行っているグループとの共同研究を進めることも検討する。

研究成果

• [雑誌論文] High-throughput synthesis of stable isotope-labeled transmembrane proteins for targeted transmembrane proteomics using a wheat germ cell-free protein synthesis system. (2015)
  • 著者名/発表者名: Takemori N, Takemori A, Matsuoka K, Morishita R, Matsushita N, Aoshima M, Takeda H, Sawasaki T, Endo Y, Higashiyama S.
  • 雑誌名: Mol Biosyst. 巻: 11 ページ: 361-365
  • DOI: 10.1039/c4mb00556b.
  • 査読あり
• [雑誌論文] MAPK Phosphatase 5 Expression Induced by Influenza and Other RNA Virus Infection Negatively Regulates IRF3 Activation and Type I Interferon Response. (2015)
  • 著者名/発表者名: James SJ, Jiao H, Teh HY, Takahashi H, Png CW, Phoon MC, Suzuki Y, Sawasaki T, Xiao H, Chow VT, Yamamoto N, Reynolds JM, Flavell RA, Dong C, Zhang Y.
  • 雑誌名: Cell Rep. 巻: 10 ページ: 1722-1734
  • DOI: 10.1016/j.celrep.2015.02.030.
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] In situ visualization of plasma cells producing antibodies reactive to Porphyromonas gingivalis in periodontitis: the application of the enzyme-labeled antigen method. (2014)
  • 著者名/発表者名: Mizutani Y, Tsuge S, Takeda H, Hasegawa Y, Shiogama K, Onouchi T, Inada K, Sawasaki T, Tsutsumi Y.
  • 雑誌名: Mol Oral Microbiol. 巻: 29 ページ: 156-1573
  • DOI: 10.1111/omi.12052.
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Involvement of hepatitis C virus NS5A hyperphosphorylation mediated by casein kinase I-α in infectious virus production. (2014)
  • 著者名/発表者名: Masaki T, Matsunaga S, Takahashi H, Nakashima K, Kimura Y, Ito M, Matsuda M, Murayama A, Kato T, Hirano H, Endo Y, Lemon SM, Wakita T, Sawasaki T, Suzuki T.
  • 雑誌名: J Virol. 巻: 88 ページ: 7541-7555
  • DOI: 10.1128/JVI.03170-13.
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Pctaire1/Cdk16 promotes skeletal myogenesis by inducing myoblast migration and fusion. (2014)
  • 著者名/発表者名: Shimizu K, Uematsu A, Imai Y, Sawasaki T.
  • 雑誌名: FEBS Lett. 巻: 588 ページ: 3030-3037
  • DOI: 10.1016/j.febslet.2014.05.060.
  • 査読あり / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] ScreenCap3: Improving prediction of caspase-3 cleavage sites using experimentally verified noncleavage sites. (2014)
  • 著者名/発表者名: Fu SC, Imai K, Sawasaki T, Tomii K.
  • 雑誌名: Proteomics. 巻: 14 ページ: 2042-2046
  • DOI: 10.1002/pmic.201400002.
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Identification of RFPL3 protein as a novel E3 ubiquitin ligase modulating the integration activity of human immunodeficiency virus, type 1 preintegration complex using a microtiter plate-based assay. (2014)
  • 著者名/発表者名: Tan BH, Suzuki Y, Takahashi H, Ying PH, Takahashi C, Han Q, Chin WX, Chao SH, Sawasaki T, Yamamoto N, Suzuki Y.
  • 雑誌名: J Biol Chem. 巻: 289 ページ: 26368-26382
  • DOI: 10.1074/jbc.M114.561662.
  • 査読あり
• [雑誌論文] The apoptotic initiator caspase-8: its functional ubiquity and genetic diversity during animal evolution. (2014)
  • 著者名/発表者名: Sakamaki K, Shimizu K, Iwata H, Imai K, Satou Y, Funayama N, Nozaki M, Yajima M, Nishimura O, Higuchi M, Chiba K, Yoshimoto M, Kimura H, Gracey AY, Shimizu T, Tomii K, Gotoh O, Akasaka K, Sawasaki T, Miller DJ.
  • 雑誌名: Mol Biol Evol. 巻: 31 ページ: 3282-3301
  • DOI: 10.1093/molbev/msu260.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Overexpression of the PAP1 transcription factor reveals a complex regulation of flavonoid and phenylpropanoid metabolism in Nicotiana tabacum plants attacked by Spodoptera litura. (2014)
  • 著者名/発表者名: Mitsunami T, Nishihara M, Galis I, Alamgir KM, Hojo Y, Fujita K, Sasaki N, Nemoto K, Sawasaki T, Arimura G.
  • 雑誌名: PLoS One. 巻: 9 ページ: e108849
  • DOI: 10.1371/journal.pone.0108849.
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] The ligand binding ability of dopamine D1 receptors synthesized using a wheat germ cell-free protein synthesis system with liposomes. (2014)
  • 著者名/発表者名: Arimitsu E, Ogasawara T, Takeda H, Sawasaki T, Ikeda Y, Hiasa Y, Maeyama K.
  • 雑誌名: Eur J Pharmacol. 巻: 745 ページ: 117-122
  • DOI: 10.1016/j.ejphar.2014.10.011.
  • 査読あり
• [学会発表] 大規模生化学的解析はバイオインフォマティクス解析を凌駕するか？ (2014)
  • 著者名/発表者名: 澤崎 達也
  • 学会等名: 産総研・東京大学合同 創薬等支援技術基盤プラットフォーム(PDIS)ワークショップ ～実験とバイオインフォマティクスの協奏による構造生命科学～
  • 発表場所: 産総研臨海副都心センター別館（東京都江東区）
  • 年月日: 2014-12-18
  • 招待講演
• [学会発表] コムギ無細胞技術を基盤とした化合物スクリーニング (2014)
  • 著者名/発表者名: 澤崎 達也
  • 学会等名: 第37回日本分子生物学会大会
  • 発表場所: パシフィコ横浜（神奈川県横浜市）
  • 年月日: 2014-11-25 – 2014-11-27
  • 招待講演
• [学会発表] コムギ無細胞HTSを用いた創薬基盤技術 (2014)
  • 著者名/発表者名: 澤崎 達也
  • 学会等名: 第87回日本生化学会大会
  • 発表場所: 京都国際会議場（京都府京都市）
  • 年月日: 2014-10-15 – 2014-10-18
  • 招待講演
• [学会発表] 無細胞技術を基盤とした自己抗体探索によるアンチエイジング医学のブレークスルーをめざして (2014)
  • 著者名/発表者名: 澤崎 達也
  • 学会等名: 第14回 日本抗加齢医学会総会
  • 発表場所: 大阪国際会議場（大阪府大阪市）
  • 年月日: 2014-06-06 – 2014-06-08
  • 招待講演
• [学会発表] GPCR研究のためのコムギ無細胞系プロテオリポソーム技術 (2014)
  • 著者名/発表者名: 澤崎 達也
  • 学会等名: 第１１回GPCR研究会
  • 発表場所: 日本科学未来館 みらいCANホール（東京都江東区）
  • 年月日: 2014-05-09 – 2014-05-10
  • 招待講演
• [備考] CELL-FREE Technology
  • URL: http://www.pros.ehime-u.ac.jp/cell-free/