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2015 年度 実績報告書

大腸菌リボソーム駆動部構成蛋白質のカセット交換による真核型合成速度の実現

研究課題

研究課題/領域番号 26650013
研究機関北海道大学

研究代表者

姚 閔  北海道大学, 先端生命科学研究科(研究院), 教授 (40311518)

研究期間 (年度) 2014-04-01 – 2016-03-31
キーワード発現系 / X線結晶解析 / タンパク質工学 / リボソーム / ストーク複合体 / 翻訳速度
研究実績の概要

リボソームの原子レベル分解能での構造解析が完成しつつある現在,その詳細な分子構造情報をもとに,次世代型タンパク質生産系の開発に向けた展開が期待される.研究代表者らはリボソーム駆動部となる機能部位(GTPaseセンター)の主要成分であるストーク複合体の構造解析に成功し,それを構成するタンパク質が,バクテリア型と真核型の間で,カセットのように交換できることを示した.本研究では,大腸菌のストークタンパク質の一部を真核型に変換したキメラストーク複合体を用いて,真核型伸長因子EF2を運搬・利用するタンパク質合成システムの作製を試みる.これにより,大腸菌の安定したリボソームを使いながらも,真核型タンパク質のフォールド速度に対応した減速型(真核型)発現系を実現し,ヒトなどの真核生物タンパク質の可溶化発現に供する.
本研究の目的を達成するために,まず,大腸菌由来のストーク複合体の背骨タンパク質L10のキメラ体をin vitro作製する必要がある.平成27年度までに,L10の3種類の変異体L10ΔCH,L10ΔCH-P0CTD,L10ΔCH-P0H3CTDについて,様々なコンストラクトを作製し,そのうち,L10ΔCHと2種類のL10ΔCH-P0CTDの可溶化発現に成功した.また,クロマトグラフィーシステムを用いて2種類のL10ΔCH-P0CTDを精製し,Native-pageを用いたL12,P1との結合実験を行った結果,大腸菌のキメラリボソームストーク複合体を創製する可能性が示唆された.

  • 研究成果

    (3件)

すべて 2015 その他

すべて 学会発表 (2件) (うち国際学会 1件) 備考 (1件)

  • [学会発表] The study on GTPase recognition mechanism of ribosomal P stalk on GTPase-associated center2015

    • 著者名/発表者名
      Takehito Tanzawa, Yuki Kumakura, Yoshikazu Tanaka, Toshio Uchiumi, Isao Tanaka, Min Yao
    • 学会等名
      The 10th International Conference on Ribosome Synthesis
    • 発表場所
      ブリュッセル(ベルギー)
    • 年月日
      2015-08-19 – 2015-08-23
    • 国際学会
  • [学会発表] リボソームストークと翻訳因子GTPaseの相互作用2015

    • 著者名/発表者名
      丹澤豪人,熊倉侑紀,田中良和,内海利男,田中勲,姚閔
    • 学会等名
      第17回日本RNA学会年会
    • 発表場所
      ホテルライフォート札幌(北海道札幌市)
    • 年月日
      2015-07-15 – 2015-07-17
  • [備考] 北海道大学 X線構造生物学研究室 ホームページ

    • URL

      http://altair.sci.hokudai.ac.jp/g6/

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公開日: 2017-01-06  

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