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本研究では活性化型FoxO3aを表皮で過剰発現するマウスを作製した。FoxO3aは線虫C.elegansの寿命調節因子であるDAF-16の哺乳動物ホモログであり、Forkhead転写因子として細胞におけるストレス応答や細胞周期制御などに関与している。我々が用いた活性化型FoxO3a-S314AはSGK1によるリン酸化を回避することで細胞核内に局在化し、下流因子の転写を活性化する。本年度は前年度に作製したFoxO3aマウスとK14-CreERTトランスジェニックマウスを交配し、表皮特異的かつ4-OHT誘導的にFoxO3a-S314Aを発現するマウスを作製した。表皮におけるFoxO3aの発現を免疫組織染色により観察したところ、FoxO3a-S314A遺伝子を持つマウスでのみ核内のFoxO3a発現上昇がみられた。また、それに伴う細胞増殖抑制についてKi67をマーカーとして免疫組織化学的手法により観察したところ、FoxO3a-S314A発現マウスでの表皮基底層におけるKi67発現の低下が見られた。FoxO3a-S314AとK14-CreERTを持つマウスから初代培養ケラチノサイトを作製し、in vitroでの4-OHTによるFoxO3a発現誘導も行った。FoxO3aの発現とともにこれらの細胞ではFoxO3a下流因子であるRictor、p27Kip1の発現上昇とAktおよびSGK1の活性上昇が認められた。以上の結果から、本研究では目的とする活性化型FoxO3a発現マウスの作製に成功した。マウス表皮での発現結果から、表皮基底層の増殖低下が予想されるものの、通常の飼育環境下においては異常が認められない。FoxO3a-S314A変異体が個体の発生には重篤な影響を及ぼさない可能性が示されたので、個体レベルで過剰発現マウスを作製することで寿命に対する効果を検証できる可能性が得られた。
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