人工ヌクレアーゼTALENを用いた遺伝子ノックアウトマダニ感染症モデルの作出

2015 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 26660229
• 研究機関: 鹿児島大学
• 研究代表者: 田仲 哲也 鹿児島大学, 農水産獣医学域獣医学系, 准教授 (00322842)
• 研究期間 (年度): 2014-04-01 – 2016-03-31
• キーワード: マダニ / ゲノム / プロモーター領域 / アクチン / チュブリン / ディフェンシン / PGK

研究実績の概要

[全体構想] マダニの遺伝子機能の解析ではRNA干渉法による遺伝子破壊が用いられてきたが、ノックアウトの技術は導入されていない。そこで、申請者らは人工ヌクレアーゼに着目し、マダニの標的遺伝子ノックアウト技術の確立を試みることが本研究の主要目的である。[今まで得られた研究成果]平成27年度に同定したアクチンやフェリチンプロモ-ターを用いてルシフェラーゼ活性を調べたが、マダニやマダニ細胞で活性は低かった。しかし、PGKプロモーターを用いてマダニ細胞でのルシフェラーゼ活性を調べたところ、活性は高かった。以上の結果から、PGKプロモーターを利用して外来遺伝子を組み込めば、マダニ体内に外来遺伝子を導入できる可能性が示唆された。

研究成果

• [雑誌論文] Course of induced infection by Eimeria krijgsmanni in immunocompetent and immunodeficient mice (2016)
  • 著者名/発表者名: Ono, U., Matsubayashi, M., Tsujio, M., Mizuno, M., Tanaka, T., Masatani, T., Matsui, T. and Matsuo, T.
  • 雑誌名: Parasitol. Res. 巻: 115 (1) ページ: 211-215
  • DOI: 10.1007/s00436-015-4737-z.
  • 査読あり / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Role of the tumor necrosis factor receptor-associated factor-type zinc finger domain containing protein 1 (TRAFD1) from the hard tick Haemaphysalis longicornis in immunity against bacterial infection (2016)
  • 著者名/発表者名: Takechi, R., Galay, R. L., Maeda, H., Matsuo, T., Kusakisako, K., Talactac, M. R., Mochizuki, M., Fujisaki, K. and Tanaka, T.
  • 雑誌名: Ticks Tick Borne Dis. 巻: 7 (1) ページ: 36-45
  • DOI: 10.1016/j.ttbdis.2015.08.002.
  • 査読あり / 国際共著 / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Functional analysis of recombinant 2-Cys peroxiredoxin from the hard tick Haemaphysalis longicornis (2016)
  • 著者名/発表者名: Kusakisako, K., Masatani, T., Miyata, T., Galay, R. L., Maeda, H., Talactac, M. R., Tsuji, N., Mochizuki, M., Fujisaki, K. and Tanaka, T.
  • 雑誌名: Insect Mol. Biol. 巻: 25 (1) ページ: 16-23
  • DOI: 10.1111/imb.12193.
  • 査読あり / 国際共著 / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] A novel C-type lectin with triple carbohydrate recognition domains has critical roles for the hard tick Haemaphysalis longicornis against Gram-negative bacteria (2016)
  • 著者名/発表者名: Maeda, H., Miyata, T., Kusakisako, K., Galay, R. L., Talactac, M. R., Umemiya-Shirafuji, R., Mochizuki, M., Fujisaki, K. and Tanaka, T.
  • 雑誌名: Dev. Comp. Immunol. 巻: 57 ページ: 38-47
  • DOI: 10.1016/j.dci.2015.12.015.
  • 査読あり / 国際共著 / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Impaired cellular immune response to injected bacteria after knockdown of ferritin genes in the hard tick Haemaphysalis longicornis (2016)
  • 著者名/発表者名: Galay, R. L., Takechi, R., Umemiya-Shirafuji, R., Talactac, M. R., Maeda, H., Kusakisako, K., Mochizuki, M., Fujisaki, K. and Tanaka, T.
  • 雑誌名: Parasitol. Int. 巻: 65 (3) ページ: 251-257
  • DOI: 10.1016/j.parint.2016.01.007.
  • 査読あり / 国際共著 / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Virucidal activity of Haemaphysalis longicornis longicin P4 peptide against tick-borne encephalitis virus surrogate Langat virus (2016)
  • 著者名/発表者名: Talactac, M. R., Yoshii, K., Maeda, H., Kusakisako, K., Hernandez, E. P., Tsuji, N., Fujisaki, K., Galay, R. L., Tanaka, T. and Mochizuki, M.
  • 雑誌名: Parasit. Vectors 巻: 9 (1) ページ: 59
  • DOI: 10.1186/s13071-016-1344-5.
  • 査読あり / オープンアクセス / 国際共著 / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Improvement of the cryopreservation method for the Babesia gibsoni parasite by using commercial freezing media (2016)
  • 著者名/発表者名: Kusakisako, K., Masatani, T., Yada Y., Talactac, M. R., Hernandez, E. P., Maeda, H., Mochizuki, M. and Tanaka, T.
  • 雑誌名: Parasitol. Int. 巻: In press ページ: In press
  • DOI: 10.1016/j.parint.2016.02.012.
  • 査読あり / 国際共著 / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Induction of gene silencing in Haemaphysalis longicornis ticks through immersion in double-stranded RNA (2016)
  • 著者名/発表者名: Galay, R. L., Hernandez, E. P., Talactac, M. R., Maeda, H., Kusakisako, K., Umemiya-Shirafuji, R., Mochizuki, M., Fujisaki, K. and Tanaka, T.
  • 雑誌名: Ticks Tick Borne Dis. 巻: In press ページ: In press
  • DOI: 10.1016/j.ttbdis.2016.03.018.
  • 査読あり / 国際共著 / 謝辞記載あり
• [学会発表] 病原微生物感染に関与するマダニ生物活性分子について (2015)
  • 著者名/発表者名: 田仲哲也
  • 学会等名: 日本衛生動物学会・日本ダニ学会共催 公開シンポジウム
  • 発表場所: 法政大学(千代田区、東京都)
  • 年月日: 2015-09-11 – 2015-09-13
  • 招待講演
• [学会発表] Virucidal activity of Haemaphysalis longicornis longicin P4 peptide against tick-borne encephalitis virus surrogate Langat virus (2015)
  • 著者名/発表者名: Melbourne Rio Talactac, 好井健太朗, 辻 尚利, 藤崎幸蔵, 田仲哲也, 望月雅美
  • 学会等名: 第158回日本獣医学会学術集会
  • 発表場所: 北里大学(八戸市、青森)
  • 年月日: 2015-09-07 – 2015-09-09
• [学会発表] Knockdown of ferritin genes increases the susceptibility of the hard tick Haemaphysalis longicornis to bacterial infection (2015)
  • 著者名/発表者名: Tetsuya Tanaka, Remil Linggatong Galay, Rie Takechi, Rika Umemiya-Shirafuji, Melbourne Rio Talactac, Hiroki Maeda, Kodai Kusakisako, Masami Mochizuki, Kozo Fujisaki
  • 学会等名: World Association for the Advancement of Veterinary Parasitology Congress 2015
  • 発表場所: The Arena and Convention Centre(Liverpool, UK)
  • 年月日: 2015-08-16 – 2015-08-20
  • 国際学会
• [学会発表] Decreased resistance of Haemaphysalis longicornis ticks to bacterialchallenge after knockdown of ferritin molecules (2015)
  • 著者名/発表者名: Remil Linggatong Galay, 武智理恵, 白藤(梅宮)梨可, Melbourne Rio Talactac, 前田大輝, 草木迫浩大, 望月雅美, 藤崎幸蔵, 田仲哲也
  • 学会等名: 第23回SADI
  • 発表場所: 名取市文化会館(名取市、宮城)
  • 年月日: 2015-06-26 – 2015-06-28
• [学会発表] フタトゲチマダニ由来ロイシンリッチリピート保有タンパク質(HlLRR)の発現動態とバベシア原虫に及ぼす影響 (2015)
  • 著者名/発表者名: 田仲哲也, 栗巣孔士, 前田大輝, 宮田 健, 草木迫浩大, Remil Linggatong Galay, Melbourne Rio Talactac, 望月雅美, 藤崎幸蔵
  • 学会等名: 第23回SADI
  • 発表場所: 名取市文化会館(名取市、宮城)
  • 年月日: 2015-06-26 – 2015-06-28
• [図書] Vaccine Design: Methods and Protocols (2016)
  • 著者名/発表者名: Galay, R. L., Miyata, T., Umemiya-Shirafuji, R., Mochizuki, M., Fujisaki, K. and Tanaka, T.
  • 総ページ数: 848
  • 出版者: Springer New York
• [図書] RNA Interference (2016)
  • 著者名/発表者名: Galay, R. L., Miyata, T., Umemiya-Shirafuji, R., Mochizuki, M., Fujisaki, K. and Tanaka, T.
  • 総ページ数: 460
  • 出版者: InTech-Open Access Publisher
• [備考] 鹿児島大学 共同獣医学部獣医学科 病態予防獣医学講座 感染症学分野
  • URL: http://www.vet.kagoshima-u.ac.jp/kadai/V-infection/sinkoukansen/top.html