研究課題/領域番号 |
26670015
|
研究機関 | 京都大学 |
研究代表者 |
石濱 泰 京都大学, 薬学研究科(研究院), 教授 (30439244)
|
研究期間 (年度) |
2014-04-01 – 2016-03-31
|
キーワード | プロテオーム / 質量分析 |
研究実績の概要 |
本研究では、(i) 高分離能直交間引き法の確立、(ii) メートル長C18逆相シリカモノリスカラムを用いたLC-MSシステムの高性能化、(iii) ヒト培養細胞試料への適用 を行い、ヒトプロテオーム完全解析のためのシステムを確立することを目標としている。本年度は、(i) 高分離能直交間引き法の確立、(ii) メートル長C18逆相モノリスカラムを用いたLC-MSシステムの高性能化、を行った。 (i) についてはHILICシリカモノリスカラムについて、最適なLC条件を検討した。LC(HILIC)-MSで直接測定することにより、間引き法に最適な画分や間引き数について検証した。(ii)については、最初にメートル長C18逆相シリカモノリスカラムのカラム長、グラジエント勾配、流速、カラム径等を最適化した。また、LC(HILIC)とLC(C18)のオンラインおよびオフライン接続システムについても検討を行った。(iii)のヒト試料については、遺伝子解析結果が入手可能で、プロテオミクス分野での標準試料の一つでもあるHeLa細胞をモデルとして用い、検討を行ったところ、8000-9000タンパク質の同定システムを確立することに成功した。
|
現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
直交間引き法において、当初計画していたHILIC法に加え、新たに金属キレートを利用した含Hisペプチドの間引き法の確立を行ったため、ヒト培養細胞試料への適用が少し遅れている。
|
今後の研究の推進方策 |
間引き法のバリエーションが広がったので、H27年度は前年度に確立した手法に基づき、LC-MS測定をより幅広く展開する予定であり、目標の達成には問題ないと考えている。
|
次年度使用額が生じた理由 |
間引き法の検討を当初計画よりも幅広く行ったため、当初予定したよりもLC-MSを用いた測定数が減少し、既設のPCおよび保存ディスクで間にあってしまい、計画していた解析PCおよびデータ保存用ディスクの購入を見送ったため。またLCMS関連試薬についても購入量が計画よりも少なくなったため。
|
次年度使用額の使用計画 |
H27年度は、H26年度に積み残したLCMS測定を行う計画であり、それに伴い、H26に計画していたPCおよび保存ディスクを購入予定である。
|