研究課題
昨年度までに引き続き、これまでの in vivo スクリーニングで得た分子の解析を行った。今年度は組織特異的な RNAi を誘導する事で、BBB を形成する細胞に自律的な機能について解析を進めた。その結果、本分子は全身に発現するにも関わらず、本実験条件下においても BBB 機能が顕著に低下することから、BBB 機能の制御は細胞自律的である事が確認できた。同時に、変異体の解析では BBB の形成後に細胞の生存率が経時的に低下し、さらに脳内の特定の細胞の生存率も低下することを確認済みであったが、BBB 特異的な RNAi ではこれらの細胞毒性は認められなかった。従って、本分子は BBB を形成する細胞の生存率には影響を与えることなくバリア機能そのものを制御している事が明らかとなった。また、通常幼虫期の BBB 構造の異常を確認するためには電子顕微鏡による構造解析が不可欠であるが、目的遺伝子と各種遺伝子との遺伝学的な相互作用を解析する全ての過程でこの確認を行う事は極めて煩雑であり、現実的ではない。そこで、今年度は蛍光レポーター系統を用いてこれに代替し得る解析法を開発した。本法においては蛍光顕微鏡下で表現型を確認できることから、解析の速度を飛躍的に向上させることに成功した。本法を用いた解析の結果、目的分子の下流で機能する複数の候補遺伝子を得ることに成功した。さらに、本分子の発現を転写レベルで調節する上流分子の探索を行う目的で、目的遺伝子やシグナル伝達経路を遺伝学的に活性化できる系統の樹立、入手を行った。今後は一連の系統を用いて網羅的に解析を進める。また、本分子の発現を抑制すると BBB 形成時の細胞に形態の異常が認められることから、今後はライブイメージングによって発生初期のイベントを解析する実験を計画している。
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Nucleic Acids Research
巻: 19 ページ: 7555-67
10.1093/nar/gkw372
http://www.okano-lab.com
