イノシトールリン脂質解析技術の開発

2014 年度 実施状況報告書

• 研究課題/領域番号: 26670132
• 研究機関: 秋田大学
• 研究代表者: 佐々木 純子 秋田大学, 医学(系)研究科(研究院), 准教授 (30333371)
• 研究期間 (年度): 2014-04-01 – 2017-03-31
• キーワード: 細胞内シグナル伝達

研究実績の概要

イノシトールリン脂質（ＰＩＰｓ）は、グリセロールにイノシトール環と２つのアシル基が結合した構造を有する。これまでの研究では、極性基であるイノシトール環のリン酸化状態により７種類に分類し、各々のＰＩＰｓはシグナリング分子として機能することがこれまでの研究から明らかにされている。一方アシル基については、技術的な問題から解析が進んでいない。本研究では、新規のＰＩＰｓ測定技術の開発と、ＰＩＰｓアシル基組成を人為的に制御可能な細胞の作出を目指す。
本年度は、まず、標準品のＰＩＰ１（ＰＩ(３)Ｐ、ＰＩ(４)Ｐ、ＰＩ(５)Ｐ）、ＰＩＰ２（ＰＩ(３,４)Ｐ２、ＰＩ(４,５)Ｐ２、ＰＩ(３,５)Ｐ２）アイソマーを識別する方法の開発に取り組んだ。極性の違いで分離できる順相カラム、酸性の物性をもつ分子を分離できるアニオン交換カラム、光学異性体の分離に用いられるキラルカラムを用いて検討したところ、ＰＩＰ１に関しては一種類のアイソマーを、ＰＩＰ２に関しては三種類のＰＩＰ２アイソマーを分離・検出する条件を見出すことに成功した。今後は残り二種のＰＩＰ１アイソマーを識別する方法を見出すとともに、細胞由来のＰＩＰｓアイソマーの識別にも応用可能であるか否か検討する。本年度はさらに、薬剤誘導性に３種類のアシル転移酵素を発現する安定発現細胞株を作製した。今後これらの細胞におけるＰＩＰｓ分子種の変動について解析を進める。

現在までの達成度 (区分)

2: おおむね順調に進展している

理由

標準品を用いた解析ではあるが、３種のＰＩＰ２アイソマーを識別する方法を確立しつつあり、当初の計画通り進んでいる。

今後の研究の推進方策

ＰＩＰ１のアイソマーを識別する方法の確立を目指す。また、本年度で作製したアシル転移酵素安定発現株を用いてＰＩＰｓの分子種変動を解析するとともに、細胞応答との関連について解析する。

研究成果

• [雑誌論文] Dachsous-Dependent Asymmetric Localization of Spiny-Legs Determines Planar Cell Polarity Orientation in Drosophila. (2015)
  • 著者名/発表者名: Ayukawa T., Akiyama M., Mummery-Widmer JL., Stoeger T., Sasaki J., Knoblich JA., Senoo H., Sasaki T., Yamazaki M.
  • 雑誌名: Cell Rep. 巻: 8 ページ: 610-621
  • DOI: 10.1016/j.celrep.2014.06.009.
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] INPP4B is a PtdIns(3,4,5)P3 phosphatase that can act as a tumor suppressor. (2015)
  • 著者名/発表者名: Kofuji S, Kimura H, Nakanishi H, Nanjo H, Takasuga S, Liu H, Eguchi S, Nakamura R, Itoh R, Ueno N, Asanuma K, Huang M, Koizumi A, Habuchi T, Yamazaki M, Suzuki A, Sasaki J, Sasaki T.
  • 雑誌名: Cancer Discovery 巻: in press ページ: in press
  • DOI: in press
• [雑誌論文] In vivo role of INPP4B in tumor and metastasis suppression through regulation of PI3K/AKT signaling at endosomes. (2015)
  • 著者名/発表者名: Chew CL, Lunardi A, Gulluni F, Ruan DT, Chen M, Salmena L, Nishino M, Papa A, Ng C, Fung J, Clohessy JG, Sasaki J, Sasaki T, Bronson RT, Hirsch E, Pandolfi PP
  • 雑誌名: Cancer Discovery 巻: in press ページ: in press
  • DOI: in press
• [雑誌論文] Loss of INPP4B causes a DNA repair defect through loss of BRCA1, ATM and ATR and can be targeted with PARP inhibitor treatment. Oncotarget. (2015)
  • 著者名/発表者名: Ip LR, Poulogiannis G, Viciano FC, Sasaki J, Kofuji S, Spanswick VJ, Hochhauser D, Hartley JA, Sasaki T, Gewinner CA.
  • 雑誌名: Oncotarget 巻: in press ページ: in press
  • DOI: in press
• [雑誌論文] Phosphatidic acid (PA)-preferring phospholipase A1 regulates mitochondrial dynamics. (2014)
  • 著者名/発表者名: Baba T, Kashiwagi Y, Arimitsu N, Kogure T, Edo A, Maruyama T, Nakao K, Nakanishi H, Kinoshita M, Frohman MA, Yamamoto A, Tani K.
  • 雑誌名: J. Biol. Chem. 巻: 289 ページ: 11497-11511
  • DOI: 10.1074/jbc.M113.531921
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Very-long-chain polyunsaturated fatty acids accumulate in phosphatidylcholine of fibroblasts from patients with Zellweger syndrome and acyl-CoA oxidase1 deficiency. (2014)
  • 著者名/発表者名: Abe Y, Honsho M, Nakanishi H, Taguchi R, Fujiki Y.
  • 雑誌名: Biochim. Biophys. Acta 巻: 1841 ページ: 610-619
  • DOI: 10.1016/j.bbalip.2014.01.001
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] リピドミクスの分析技術と将来展望 (2014)
  • 著者名/発表者名: 中西広樹
  • 雑誌名: オレオサイエンス誌 巻: 8 ページ: 321-327
  • DOI: none
• [学会発表] The class III PI3K and phosphatidylinositol 3-phosphate ensure structural and functional integrity of cardiomyocytes (2015)
  • 著者名/発表者名: Hirotaka Kimura, Satoshi Eguchi, Junko Sasaki, Takehiko Sasaki
  • 学会等名: the 120th Annual Meeting of The Japanese Association of Anatomists, the 92nd Annual Meeting of The Physiological Society of Japan
  • 発表場所: 兵庫
  • 年月日: 2015-03-21 – 2015-03-23
• [学会発表] The novel mechanism of tumor suppression by INPP4B (2015)
  • 著者名/発表者名: Junko Sasaki, Satoshi Kofuji, Takahiro Kimura, Shunsuke Takasuga, Hiroki Nakanishi, Takehiko Sasaki
  • 学会等名: 2nd International Symposium on Protein Modifications in Pathogenic Dysregulation of Signaling
  • 発表場所: 東京
  • 年月日: 2015-01-23 – 2015-01-24
• [備考]
  • URL: http://www.med.akita-u.ac.jp/~bisei/