研究課題
MitoNEETファミリーはII型糖尿病改善薬ピオグリタゾンの新規標的鉄硫黄酵素として発見され、微生物からヒトに至るまで高度に保存されている。先に作成した高度好熱菌Thermus thermophilusの細菌型mitoNEETホモログ（TthNEET）遺伝子完全破壊株では、生育時「グルコース感受性」が顕著に増強されることで悪化する。この分子基盤を明らかにするため、昨年度にこのThermus表現型とTthNEET鉄硫黄クラスター中心の酸化還元電位変動の相関を重点的に調べたが、予想外の結果を得たため、本年度は下記研究を遂行した。(1) TthNEETクラスター酸化還元電位の異なる変異酵素や他ホモログ等の結晶構造解析（構造精密化）を完了し、また酵素の分光解析も遂行した。(2) 昨年度に続き、His-tag付きTthNEETを用いたプルダウン解析を行い、電気泳動で同定したタンパク質とTthNEETとの共発現も試みたが、有為な直接相互作用は確認できなかった。少なくともこのアプローチでは、TthNEETと相互作用しうる未知タンパク質同定が技術的に困難と分かった。(3) 当初計画で想定していなかった結果を得たため、Thermus野性株とTthNEET完全欠損株につき、二次元電気泳動と質量分析によるプロテオーム解析をすすめ、「グルコース感受性」生育増殖阻害の表現型と対応したスポットの検出・タンパク質同定に成功した。今後は二次元電気泳動の分解能を高め、他のタンパク質候補やマイクロアレイ解析などをすすめる必要がある。(4) 先に同定した藍藻mitoNEETホモログ（SynechoNEET）についても予備的な解析をすすめた（論文として公表予定）。
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Methods Enzymol. (Isotope Labeling of Biomolecules - Labeling Methods)
巻: 565 ページ: 45-66
10.1016/bs.mie.2015.05.012.
