| 研究課題/領域番号 |
26670274
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| 研究機関 | 群馬大学 |
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研究代表者 |
八木 久子 群馬大学, 医学部附属病院, 助教 (50717832)
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| 研究期間 (年度) |
2014-04-01 – 2017-03-31
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| キーワード | アレルギー / RAST / IgE / 好塩基球 |
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| 研究実績の概要 |
本研究ではRAST法の簡便さと、好塩基球活性化試験(Basophil Activation Test, 以下BAT法)の正確性を併せ持つ手法を開発することを目的として、好塩基球細胞株をベースにしたアレルゲンによる活性化試験（Basophil cell Line Activation Test: 以下BLAT）法の開発を目的とする。
［1］幼弱好塩基球細胞株（KU812）の分化培養系の確立（昨年度達成）
［2］確立した細胞株の機能解析：昨年度確立したＫＵ８１２細胞クローンのスクリーニングのため、①分化能（FcεRI発現量が高いか）、②IgE結合能、③活性化能を調べた。
①抗FcεRI抗体を使用してフローサイトメトリーにてFcεRⅠの発現量をIL3刺激とサイトカイン無刺激で測定した。その後リアルタイムPCRで遺伝子を確認し、FcεRⅠ発現の高いクローンを以下の実験に用いた。②細胞をヒトIgE蛋白に反応させ、フローサイトメトリーにてIgE結合能を確認した。サイトカイン無刺激ではFcεRI発現細胞のうち、50-60%はIgE結合能があることが判明した。次に細胞を各々サイトカイン無刺激、IL3、IL6、TNFα刺激下で分化能やIgE結合能を測定したが、変わらなかった。③細胞にヒトIgE蛋白を添加しＩｇＥ結合させた後、抗ＩｇＥ抗体で刺激し、フローサイトメトリーで好塩基球活性化マーカー（CD164、CD63、ＣＤ２０３ｃ）量を確認した。その結果、ＣＤ２０３ｃは全く変動なかったが、抗ＩｇＥ抗体の刺激でＣＤ63とCD１６４は活性化率の増加がみられた。
［3］患者血清を用いた抗原特異的活性化：患者血清（スギ花粉症）と抗原（スギ花粉）を用いて、活性化するかをコントロールとともに確認した。結果、活性化細胞率（/FcεRⅠ）はIL3刺激条件では増加していたが、無刺激では低下していた。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
BLAT法に最適な分化能、IgE結合能、活性化能をもつ細胞株が樹立できたため
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| 今後の研究の推進方策 |
サイトカインの種類や刺激時間などを検討し、分化やIgE結合能のよい条件を見つける。
ＣＤ６３，ＣＤ１６４以外のActivation Markerを検討する。
スギ花粉症患者にRAST、BAT測定も行い、BLATと比較する。
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