| 研究課題/領域番号 |
26670461
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| 研究機関 | 奈良県立医科大学 |
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研究代表者 |
秦野 修 奈良県立医科大学, 医学部, 講師 (40164850)
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| 研究分担者 |
竹森 洋 国立研究開発法人医薬基盤・健康・栄養研究所, 医薬基盤研究所 疾患モデル小動物研究室, 客員研究員 (90273672) [辞退]
大西 健 茨城県立医療大学, 保健医療学部, 教授 (50152195)
矢尾 育子 浜松医科大学, 学内共同利用施設等, 准教授 (60399681)
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| 研究期間 (年度) |
2014-04-01 – 2017-03-31
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| キーワード | ステロイドホルモン / 副腎皮質 / 質量分析イメージング / 誘導体化試薬 / On-Tissue 誘導体化 |
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| 研究実績の概要 |
哺乳動物のステロイドホルモンは、主に副腎皮質、精巣、卵巣で、CYPsやHSDsの連携によって合成・分泌される。これらのステロイドホルモンは、組織切片上で従来の免疫組織化学法などで検出できないために、各々のステロイドホルモン産生部位（細胞）については、それらの最終合成酵素の発現部位を検出することによって、間接的に推定されていた。本研究ではステロイドホルモン産生機構の解明を目的として、質量分析イメージング法を用いて、組織切片上で直接、ステロイドホルモンを検出する実験系の開発を行った。ステロイドホルモンは、質量分析MALDI法のマトリックスとして一般的なCHCAやDHB等の有機化合物を用いると、イオン化効率が悪くピーク強度が低いが、ステロイドホルモンのA環のケトン基に反応するGirard-T（GirT）試薬を用いて、代表的なステロイドホルモン類を誘導体化することにより、強いイオン化シグナルが得られた。そこで、ラット、ウサギ等の副腎の凍結組織切片(10μm厚)を作成し、スライドグラス上に貼付した切片にGirT試薬を噴霧器でスプレーし（On-Tissue誘導体化）、引き続きCHCAマトリックスを噴霧した後に、質量分析MALDI法スキャンを行い、イメージング検出を行った。その結果、Corticosterone-GirT, Progesterone-GirT, Cortisol-GirT等の誘導体化されたステロイドホルモンのm/z値の質量分析イメージング像が、副腎皮質の束状層と網状層に検出された。この際、超高質量分解能（質量分解能100万）のFT-ICR MS機を用いることによって、予想されるm/z値の ±0.001以内の正確さで、これらのイオン化ステロイドホルモンのイメージング検出が達成された。
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