研究課題
悪性腫瘍と先天性発達障害に関する共通の分子機構を解明するために、本年度は、自閉症にEwing肉腫を合併した例のエクソーム解析を行った。Ewing肉腫は、主として小児や若年性の骨・軟部組織に発生する小円形細胞肉腫であり、分子生物学的にはEWS-FLI1などEWS-ETS融合遺伝子が特徴的な遺伝子異常であることが知られている。解析症例は11歳男児(症例1)。乳幼児期より言葉の遅れ指摘され、自閉症と診断されていた。11歳時に左上腕骨にEwing肉腫を発症し、外科治療と化学療法を施行され、寛解に達した。本症例の腫瘍組織と末梢血よりDNAを抽出し、SureSelectを用いてエクソーム解析を行った。対照として、正常児に発症したEwing肉腫2例も同時に解析した(症例2,3)。変異候補はSangerシークエンスを行い、複数の体細胞変異を検出した。症例1では、悪性黒色腫で検出されたがん抑制遺伝子、体細胞変異を見出した。Grmline変異として、神経の分化に関与する遺伝子の変異と神経系で強く発現する転写因子の変異を検出した。対照の症例2では、p53の体細胞変異が確認されたが、もう1例では、有意な体細胞変異は見出されなかった。以上の結果より、Ewing肉腫と自閉症には、神経系の分化や転写に関与する遺伝子異常が発症に関与している可能性が示唆された。
2: おおむね順調に進展している
本年度は、Ewing肉腫を合併した例のエクソーム解析を行った。解析した症例に関しては、十分なデータ量が収集できた。
次世代シークエンサーによるエクソーム解析. 引き続き全試料の全エクソンのリシーケンスの完了を目指す。家族歴が濃厚な遺伝性疾患については罹患患者とともに解析可能な非罹患家系メンバーが同時に解析される。SNPアレイによるゲノムコピー数の解析. エクソーム解析により原因遺伝子が同定されなかった試料に関して、ゲノムの大きな欠失や増幅などの異常を想定して、Affymetrix社GeneChip500Kアレイ(CNAG/AsCNAR解析アルゴリズム)を用いて、網羅的ゲノムコピー数の解析を行う。網羅的エピゲノム解析. 白血病や骨髄異形成症候群ではエピジェネティックな修飾と発がんの直接的な関連性が示され、新たな治療戦略の標的として注目されている。またPrader-Willi症候群やAngelman症候群など発達障害を伴う一部の先天異常症でもメチル化との関連性が明らかとなった。そこで、本年度は発達障害と腫瘍の発症に関与するエピジェネティックな修飾の網羅的解析を行う。標的遺伝子の同定と遺伝子性状の解析. 解析した試料におけるゲノム異常の共通領域内に存在する有用な遺伝子(群)につき、real-time PCRを用いて発現解析を行う。またHeterodyplex mobility assay法、直接塩基配列決定法による変異解析およびコロニーアッセイなどにより、腫瘍化との関連性のさらなる検証を行い、標的遺伝子の同定を試みる。
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すべて 雑誌論文 (24件) (うち査読あり 24件、 オープンアクセス 24件、 謝辞記載あり 5件) 学会発表 (53件) (うち招待講演 3件)
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