2015 年度研究成果報告書

内在性レトロウイルスの制御に関する研究

研究課題

研究課題/領域番号	26670582
研究種目	挑戦的萌芽研究
配分区分	基金
研究分野	外科学一般
研究機関	大阪大学
研究代表者	宮川周士大阪大学, 医学(系)研究科(研究院), 准教授 (90273648)
研究期間 (年度)	2014-04-01 – 2016-03-31
キーワード	ブタ内在性レトロウィルス(PERVｓ) / CRISPR/CRシステム / OFF Targetting効果 / Gag-pol
研究成果の概要	CRISPRシステムによるPERVのknockoutを試みた。PERV遺伝子のgagおよびpolの領域においてknockout効率の高いターゲット配列 (gRNA) をそれぞれ1か所ずつ選定し、pX330 = U6-gRNA+Cas9+neomycinを作製した。次に、gag領域をターゲットとしたplasmidを、PK15細胞にtransfectionし、neomycinによるselection後、17個のクローンを得た。Integrateされているクローンは15個に絞られた。さらにこれらクローンのgag-KO領域をダイレクトシークエンスした結果、1個のクローンのgag領域に変異を確認できた。
自由記述の分野	移植免疫