| 研究課題/領域番号 |
26670636
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| 研究機関 | 東京大学 |
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研究代表者 |
武笠 晃丈 東京大学, 医学部附属病院, 講師 (90463869)
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| 研究分担者 |
田中 將太 東京大学, 医学部附属病院, 助教 (80643725)
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| 研究期間 (年度) |
2014-04-01 – 2017-03-31
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| キーワード | 血管芽腫 / VHL病 / 腫瘍血管新生 |
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| 研究実績の概要 |
昨年度に引き続き、これまで収集した全32例の血管芽腫（以下、HBと略）の臨床検体に加えて、東京大学脳神経外科のVHL病外来患者や、新たなHB摘出術施行症例に対して、さらなる正常血液検体や、腫瘍検体（凍結検体など）の収集を行った。腫瘍検体については、遺伝子解析のためのDNA抽出を行い、また、VHL病が疑われる患者においては、遺伝カウンセリングを施行後、本人の承諾を得た後、正常血液からDNA抽出を行い、VHL病の遺伝子診断を、主に、direct sequencing法とMLPA法を用いて行った。
昨年度までの我々の検討では、特に、VHL病でない孤発性の患者のHB腫瘍検体では、VHL遺伝子の変異や欠損の同定される割合が低かった。その為、VHL遺伝子異常以外の機序が、孤発性HBの腫瘍化には必要と考えられた。しかし、2014年12月、アメリカのMGHの研究グループによって、次世代シークエンサを用いた解析で、孤発性HBであっても、VHL遺伝子異常が多い事が報告された。そこで、当科の腫瘍検体に対しても、Ion Torentを用いたtarget sequenceを行ったところ、孤発性HB検体でも、VHL遺伝子異常が多い事を確認した。しかし、target sequenceを行ってもVHL遺伝子異常がない症例はあり、それらの症例の中には、VHL遺伝子プロモーターのメチル化を認める症例があることが、methylation-specific PCR法及び、bisulfite sequence 法を用いることで確認された。
従って、これまでの我々の研究実績をまとめると、VHL病患者のHB検体でも、孤発性のHB検体であっても、VHL遺伝子異常と不活化が半分以上の検体で認められており、改めて、HBの腫瘍化には、VHL遺伝子異常が重要な働きをしている可能性が出てきた。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
VHL病では、HBだけでなく、腎がんも起こりやすい事が知られている。最近のゲノム解析データでは、腎がんでは、VHLだけでなく、PBRM1やBAP1などの遺伝子異常が多い事が知られている。そこで、当科のHB検体においても、腎がんで遺伝子異常の頻度が高い遺伝子に対して、target sequenceを行ったが、現時点では、有意な遺伝子異常を伴う遺伝子は判明していない。本研究の第1目標であった、HB腫瘍化に対する、VHL遺伝子以外の新規原因遺伝子の同定に関しては、遅れているのが現状である。
本研究において、当科と京都大学iPS研究所と連携研究を行っていたが、平成27年度には、当科より、2検体、VHL病症例の正常皮膚と正常血液をiPS研究所に提供し、いずれもVHL病特異的iPS細胞の樹立に成功している。また、本研究のもうひとつの連携先である、京都大学中村研究室では、現在、VHL病特異的iPS細胞に対して、VHL遺伝子異常を導入して、血管芽腫細胞株の樹立を試みているところである。
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| 今後の研究の推進方策 |
前述のように、HBにおける新規原因遺伝子異常の同定に関しては、困難をきたしている状態である。実際、前述した、MGHが報告した論文においても、HBに対して、exome解析をしているが、VHL遺伝子異常以外、有意な遺伝子異常はなかったと報告されている。
従って、今後は、検体数を増やし、再度、target sequenceを行うだけでなく、網羅的メチル化解析やRNA-seqなどの発現解析を行う事で、新規原因遺伝子の同定を試みる。また、iPS細胞などから樹立された血管芽腫細胞株ができた場合、VHL遺伝子異常が、HBの腫瘍化にどのように関与するのかを解析していく方針である。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
これまでの研究結果をもとに、VHL遺伝子異常を有さない血管芽腫の症例について、エクソーム解析を予定していたが、他の研究グループからの報告により、VHL遺伝子異常の同定にはサンガーシークエンス方では不十分な可能性がでた。このため、上述のようにまず、Ion Torrentを用いたtarget sequenceを行い、腫瘍率が低い検体だがVHL遺伝子変異を有しているものの選別を行った。このため、研究計画に遅れが生じて、次年度に持ち越す必要が生じた。
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| 次年度使用額の使用計画 |
前述のごとく、今後、再度target sequenceを行うだけでなく、網羅的メチル化解析や発現解析を行う事で、新規原因遺伝子の同定を試みる計画であり、それらに拠出する予定である。
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