研究課題
●転移を有する腎癌、尿路上皮癌、前立腺癌患者で、治療前、治療中の画像診断による効果判定時に血清・血漿を採取。各サンプルよりタンパク、エキソソームmiRNAを得る。患者が明らかなPDや治療耐性で超進展状態になったmiRNAや各種サイトカインを解析。ドミナントなmiRNA異常発現を絞る。このドミナントな異常を過去の経時サンプルでのfractionを評価。治療抵抗性へのキーとなる異常を同定することを目的とした。●転移を有する腎癌、尿路上皮癌、前立腺癌患者で、治療前、治療中の画像診断による効果判定時に血清・血漿を採取。各サンプルよりタンパク、エキソソームmiRNAを得る。患者が明らかなPDや治療耐性で超進展状態になったmiRNAや各種サイトカインを解析。ドミナントなmiRNA異常発現を絞る。このドミナントな異常を過去の経時サンプルでのfractionを評価。治療抵抗性へのキーとなる異常を同定することを目的とした。●転移性進行腎癌の代表的治療薬であるアキシチニブ（AXT）で治療した進行腎癌患者血清中のmiRNAや血清蛋白の発現と予後の関連を解析し、AXT治療効果を予測する血清因子を探索した。対象は当院でAXTを投与した進行腎癌16例。AXT投与前後の血清miR-21、miR-155、miR-210、miR-378の発現を定量PCRで解析した。また、AXT投与前後の血清中の16種類の蛋白発現をBio-Plex Pro; Human Cancer Biomarker Panelで解析した。●結果として、AXT投与後miR-21低下群は有意に無増悪生存期間が延長した（p = 0.032）。AXT投与前HGF、sIL-6R、PECAM-1高値群で有意に無増悪生存期間が延長した（p = 0.043, p = 0.033, p = 0.002) 。以上より、AXT治療前後の血清miR-21変化や、AXT投与前の血清PECAM-1、sIL-6R、HGFが治療効果を予測するバイオマーカーとなりうると考えられた。
2: おおむね順調に進展している
●液性生検（Liquid Biopsy）の実地臨床応用にむけて、患者末梢血からのエクソソーム抽出⇒エクソソーム由来のmiRNA抽出に成功し、さらには代表的miRNAの定量化解析にも成功、アッセイを確立できた。また、同時に血清サイトカインもパネルで解析し、治療効果を反映するマーカー候補も同定できた。今後はエクソソーム由来のmiRNAの定量結果とサイトカインの関係、治療効果や予後との関連性を解析し、転移性腎癌に対する分子標的薬（血管新生阻害薬）をモデルに液性生検（Liquid Biopsy）の確立を目指す。●27年度は転移性進行腎癌の代表的治療薬であるアキシチニブ（AXT）で治療した進行腎癌患者血清中のmiRNAや血清蛋白の発現と予後の関連を解析し、AXT治療効果を予測する血清因子を探索した。対象は当院でAXTを投与した進行腎癌16例。AXT投与前後の血清miR-21、miR-155、miR-210、miR-378の発現を定量PCRで解析した。また、AXT投与前後の血清中の16種類の蛋白発現をBio-Plex Pro; Human Cancer Biomarker Panelで解析した。●結果として、AXT投与後miR-21低下群は有意に無増悪生存期間が延長した（p = 0.032）。AXT投与前HGF、sIL-6R、PECAM-1高値群で有意に無増悪生存期間が延長した（p = 0.043, p = 0.033, p = 0.002) 。以上より、AXT治療前後の血清miR-21変化や、AXT投与前の血清PECAM-1、sIL-6R、HGFが治療効果を予測するバイオマーカーとなりうると考えられた。●以上、おおむね、研究計画提出時の計画や目標にむけて進行していると考えている。
●平成26年、27年度に進めた研究を継続し、さらに多くの検体やさらに多くのポイント（治療経過におけるイベントが発生した時点）での検体収集を行う。●そのうえで、エキソソーム由来miRNAの解析を、先ず各患者で薬物療法によって、 (ⅰ)効果を示し最も病変が少なくなった時点の血漿サンプルと、 (ⅱ)抵抗性となり明らかな病変が多発化・進行した時点での血漿サンプルにおいて、miRNA Array解析（miRCURY LNA microRNA Array）を用いて、3000を超えるmiRNA種を一挙にスクリーニングする。この (ⅰ)と(ⅱ) のmiRNAの発現量プロフィールを比較し、著しい違いを示した、miRNAを治療抵抗性関連候補として、解析する。●また、血清サイトカインをパネルBio-Plex Pro; Human Cancer Biomarker Panelを用いて評価し、miRNAのデータや臨床データとの相関の有無を検討する。●さらには候補遺伝子については、トランスフェクションクション、ノックダウン、免疫染色、プロモーター解析、その上での、細胞における過剰発現、過少発現時の浸潤能、増殖能、転移能、抗アポトーシス作用などへの影響を評価し、分子マーカーや分子標的となるかを検討する
すべて 2016 2015 その他
すべて 雑誌論文 (4件) (うち国際共著 1件、 査読あり 4件、 オープンアクセス 1件) 学会発表 (1件) (うち国際学会 1件) 備考 (1件)
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http://www.med.akita-u.ac.jp/~hinyoki/
