ライブラリースクリーニングを用いたCRPCに対する新規創薬標的分子の探索

2015 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 26670700
• 研究機関: 京都大学
• 研究代表者: 中村 英二郎 京都大学, 医学(系)研究科(研究院), 准教授 (90293878)
• 研究分担者: 室伏 善照 京都大学, 医学(系)研究科(研究院), 研究員 (50448578)
• 研究期間 (年度): 2014-04-01 – 2016-03-31
• キーワード: CRPC / Androgen

研究実績の概要

平成２６年度にCellecta 社の Pooled Lentiviral shRNA Librariesを LNCaP 細胞にInfectionを行い、Puromycin で selection を行った後に CSFBS 下（アンドロゲン非存在下）での培養を開始した。平成２７年度に、同条件下において増殖を来したクローン（shRNAの発現によりアンドロゲン非依存性増殖能を獲得した細胞）をpick up することに成功し、genomic DNAを抽出、 Integrate されたshRNA 配列をPCR 法により回収した後にIn-Fusion 法にてlibrary のbackbone plasmidに再導入を行った。回収された plasmid を LNCaP 細胞に再度 Infection を行い、CSFBS 下での細胞増殖能の確認を行った（２次スクリーニング）ところ、複数のクローンにおいて、実験の再現性が確認された。これらのクローンに関して、ELSAによるPSAの産生、WBによるARの発現確認を行った。

研究成果

• [雑誌論文] Role of IL13RA2 in Sunitinib Resistance in Clear Cell Renal Cell Carcinoma. (2015)
  • 著者名/発表者名: Shibasaki N, Yamasaki T, Kanno T, Arakaki R, Sakamoto H, Utsunomiya N, Inoue T, Tsuruyama T, E Nakamura, Ogawa O, and Kamba T.
  • 雑誌名: PLoS One 巻: 10 ページ: e0130980
  • 査読あり / オープンアクセス / 謝辞記載あり
• [備考] 京都大学大学院医学研究科メディカルイノベーションセンター悪性制御研究ラボ
  • URL: http://www.dsk.med.kyoto-u.ac.jp/