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Doxycyclin (Dox) 誘導性にBRCA1に対するshRNAとエストロゲンレセプター(ER)を発現する安定細胞株（shBRCA1・ER細胞）および、コントロールとしてshBRCA1のみを発現する細胞株、ERのみを発現する細胞株（全てER陰性ヒト乳腺diploid細胞株MCF10Aより平成26年度に作成した）を用いて実験を行った。①Dox添加時のDNA損傷をγH2AX 核内fociで解析したところ、shBRCA1・ER細胞で増加する傾向が認められた。②GFPタグを付けたRNase H1のDNA-RNA hybrid binding (HB) ドメインを作成して細胞内に一過性に発現させ、フローサイトメータにてR-loopを検出することが可能となったが、現在の所、明らかに有意な結果は得られていない。③Dox添加時のグローバルなヘテロクロマチン変化をMicrococcal nucleaseアッセイにて解析したところ、shBRCA1・ER細胞でクロマチンが弛緩するという初期結果が得られた。④Dox添加で長期培養した際に生じる遺伝子変化を、次世代シーケンサーを用いたターゲットリシーケンスにて解析したところ、shBRCA1・ER細胞においてTP53に変異の集積が認められた。⑤Dox添加で長期培養した細胞の染色体異常をG-bandingで解析したが、現在の所、有意な結果は得られていない。⑥分裂期クロマチン架橋をEdUによるDNAの蛍光発色にて解析したが、各細胞間に差を認めなかった。
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