遺伝性網膜疾患カニクイザルの作製とその病理学的解析

2014 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 26670762
• 研究機関: 独立行政法人国立病院機構(東京医療センター臨床研究センター)
• 研究代表者: 岩田 岳 独立行政法人国立病院機構(東京医療センター臨床研究センター), 分子細胞生物学研究部, 部長 (90374157)
• 研究分担者: 溝田 淳 帝京大学, 医学部, 教授 (10239262) ; 下澤 律浩 独立行政法人医薬基盤研究所, 霊長類医科学研究センター, 研究員 (50300786)
• 研究期間 (年度): 2014-04-01 – 2015-03-31
• キーワード: 医歯薬学 / 外科系臨床医学 / 眼科学 / 眼生化学・分子生物学 / カニクイザル

研究実績の概要

ヒトと同じ眼球構造を持つカニクイザルにおいて眼疾患モデル動物を作成するために、カニクイザル受精卵へCRISPR/Cas9システムを用いたゲノム編集技術を応用した。FSHおよびhCGを雌ザルに投与し、成熟卵子を回収した。また、精子は採取した射出精液を洗浄し、回収した。顕微授精により雄雌前核を持つ受精卵を作出し、この前核に目的の眼疾患遺伝子の変異を誘導するように構築したCRISPR/Cas9発現ベクターを注入した。このベクター注入卵について体外培養および胚移植を行った。体外培養したベクター注入卵は胚盤胞に発生し、これからES細胞が樹立された。このES細胞において目的遺伝子の変異が誘導されていることが確認された。また、ベクター注入卵の胚移植を行ったところ、２個体で妊娠が成立した。その内１個体は流産したものの、１個体が妊娠を継続し、雌の新生児を得るに至った。しかしながら、新生児血液や胎盤などで目的遺伝子の変異は確認できなかった。ES細胞で変異が誘導されたことから、実験を継続することで遺伝子変異を持つカニクイザルが得られることが期待される。

研究成果

• [雑誌論文] High-Temperature Requirement A Serine Peptidase 1 Gene is Transcriptionally Regulated by Insertion/Deletion Nucleotides Located at the 3 Prime End of Age-Related Maculopathy Susceptibility 2 Gene in Patients with Age-Related Macular Degeneration. (2015)
  • 著者名/発表者名: Iejima D, Itabashi T, Kawamura Y, Noda T, Yuasa S, Fukuda K, Oka C, Iwata T.
  • 雑誌名: The Journal of Biological Chemistry 巻: 290 ページ: 2784-2797
  • DOI: 10.1074/jbc.M114.593384.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Novel nonsense and splice site mutations in CRB1 gene in two Japanese patients with early-onset retinal dystrophy Documenta Ophthalmologica. (2015)
  • 著者名/発表者名: Kuniyoshi K, Ikeo K, Sakuramoto H, Furuno M, Yoshitake K, Hatsukawa Y, Nakao A, Kusaka S, Shimomura Y, Iwata T.
  • 雑誌名: Documenta Ophthalmologica 巻: 130 ページ: 49-55
  • DOI: 10.1007/s10633-014-9464-8.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Lack of association of LOXL1 gene variants in Japanese patients with central retinal vein occlusion without clinically detectable pseudoexfoliation material deposits. (2015)
  • 著者名/発表者名: Tanito M, Hara K, Akahori M, Harata A, Itabashi T, Takai Y, Kaidzu S, Ohira A, Iwata T.
  • 雑誌名: Acta Ophthalmologica 巻: 93 ページ: e214-217
  • DOI: 10.1111/aos.12534.
  • 査読あり
• [雑誌論文] RHO mutations (p.W126L and p.A346P) in two Japanese families with autosomal dominant retinitis pigmentosa. (2014)
  • 著者名/発表者名: Katagiri S, Hayashi T, Akahori M, Itabashi T, Nishino J, Yoshitake K, Furuno M, Ikeo K, Okada T, Tsuneoka H and Iwata T.
  • 雑誌名: Journal of Ophthalmology 巻: 2014 ページ: 210947
  • DOI: 10.1155/2014/210947.
  • 査読あり
• [雑誌論文] RPE65 mutations in two Japanese families with Leber congenital amaurosis. (2014)
  • 著者名/発表者名: Katagiri S, Hayashi T, Yoshitake K, Akahori M, Ikeo K, Gekka T, Tsuneoka H, Iwata T.
  • 雑誌名: Ophthalmic Genetics 巻: 12 ページ: 1-9
  • 査読あり
• [雑誌論文] Heterozygote Wdr36-deficient mice do not develop glaucoma. (2014)
  • 著者名/発表者名: Gallenberger M, Kroeber M, Koch M, März L, Fuchshofer R, Iwata T, Braunger BM, Tamm ER.
  • 雑誌名: Experimental Eye Research 巻: 128 ページ: 83-91
  • DOI: 10.1016/j.exer.2014.09.008.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Overexpression of Htra1 and exposure to mainstream cigarette smoke leads to choroidal neovascularization and subretinal deposits in aged mice. (2014)
  • 著者名/発表者名: Nakayama M, Iejima D, Akahori M, Kamei J, Goto A, Iwata T.
  • 雑誌名: Investigative Ophthalmology and Visual Science 巻: 55 ページ: 83-91
  • DOI: 10.1167/iovs.14-14453.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Whole exome analysis identifies frequent CNGA1mutations in Japanese population with autosomal recessive retinitis pigmentosa. (2014)
  • 著者名/発表者名: Katagiri S, Akahori M, Sergeev Y, Yoshitake K, Ikeo K, Furuno M, Hayashi T, Kondo M, Ueno S, Tsunoda K, Shinoda K, Kuniyoshi K, Tsurusaki Y, Matsumoto N, Tsuneoka H, Iwata T.
  • 雑誌名: PLoS One 巻: 9 ページ: e108721
  • DOI: 10.1371/journal.pone.0108721.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Novel C8orf37 mutations in patients with early-onset retinal dystrophy, macular atrophy, cataracts, and high myopia. (2014)
  • 著者名/発表者名: Katagiri S, Hayashi T, Yoshitake K, Akahori M, Ikeo K, Gekka T, Tsuneoka H, Iwata T.
  • 雑誌名: Ophthalmic Genetics 巻: 12 ページ: 1-8
  • 査読あり
• [雑誌論文] Pattern visual evoked potentials elicited by organic electro-luminescence screen. (2014)
  • 著者名/発表者名: Matsumoto CS, Shinoda K, Matsumoto H, Funada H, Sasaki K, Minoda H, Iwata T, Mizota A.
  • 雑誌名: BioMed Research International 巻: 2014 ページ: 606951
  • DOI: 10.1155/2014/606951.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Binocular interaction of visually evoked cortical potentials elicited by dichoptic binocular stimulation. (2014)
  • 著者名/発表者名: Matsumoto CS, Nakagomi R, Matsumoto H, Minoda H, Shinoda K, Iwata T, Mizota A.
  • 雑誌名: Journal of Vision 巻: 14 ページ: pii: 4
  • DOI: 10.1167/14.11.4.
  • 査読あり