ヒトの骨転移病態を再現する遺伝子改変マウスモデルの樹立

2015 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 26670806
• 研究機関: 大阪大学
• 研究代表者: 米田 俊之 大阪大学, 歯学研究科(研究院), 招へい教員 (80142313)
• 研究期間 (年度): 2014-04-01 – 2016-03-31
• キーワード: 骨転移 / 遺伝子改変マウス

研究実績の概要

本研究では骨転移の分子メカニズム解明を可能にする、発癌から骨転移までを再現する骨転移モデルマウスの作製を試みた。まず、乳癌ウイルスのMMTV遺伝子プロモーターに発がん遺伝子であるHER2を組み込んだ自然発生型乳癌モデルマウスを入手しマウス個体の飼育および維持を行った。そして、申請者らが同定した骨転移に重要な遺伝子であるCadherin-11と、改変型GFP遺伝子とルシフェラーゼ遺伝子を融合させることにより蛍光タンパク質と発光タンパク質の利点を併せ持つffLuc遺伝子を２Ａ配列で挟み、MMTV遺伝子プロモーター下に組み込んだ。このトランスジェニックベクター（MMTV-Cadｈh11-2A-ffLuc）をエンドトキシンフリーのプラスミド精製キットを用いて精製し、直鎖化を行った。過排卵処理したFVB/NJc1の雌マウスと雄マウスとを自然交配させ、マウスから１２１個の受精卵を回収しインジェクションを行い、翌日状態の良かった９８個の胚を偽妊娠マウスに移植した。得られた産仔の尻尾よりゲノムＤＮＡを精製し、ＰＣＲ法にてトランスジーンの確認を行ったがトランスジェニックマウスを得ることができなかった。その後、雌マウスの数を増やし体外受精で得られた卵にＤＮＡをインジェクションし２細胞期胚までIn Vitroで培養した後移植を行ったが、トランスジェニックマウスを得ることができなかった。２５０個以上の移植を行ったがＦＶＢ系統でのトランスジェニックマウスが得られなかったので、FVB系統よりも産仔数が多いBDF1マウスの受精卵にインジェクションを行った。

研究成果

• [国際共同研究] インディアナ大学(米国)
  • 国名: 米国
  • 外国機関名: インディアナ大学
• [雑誌論文] Contribution of acidic extracellular microenvironment to cancer-associated bone pain. (2015)
  • 著者名/発表者名: Yoneda T, Hiasa M, Nagata Y, Okui T, White F.
  • 雑誌名: Biochim Biophys Acta 巻: 1848(10) ページ: 2677-2684
  • DOI: 10.1016/j.bbamem.2015.02.004
  • 査読あり / 国際共著
• [雑誌論文] Acidic microenvironment and bone pain in cancer-colonized bone. (2015)
  • 著者名/発表者名: Yoneda T, Hiasa M, Nagata Y, Okui T, White F
  • 雑誌名: BoneKey 巻: 4 ページ: 690
  • DOI: 10.1038/bonekey.
  • 査読あり / 国際共著
• [雑誌論文] がんと骨微小環境 (2015)
  • 著者名/発表者名: 米田俊之
  • 雑誌名: 臨床免疫・アレルギー科 巻: 64(2) ページ: 133-138
• [学会発表] Osteocytes are an Important Mediator of Bone Pain in Myeloma (2015)
  • 著者名/発表者名: Hiasa M, Okui T Nagata Y, Allette YM, Ripsch MS, Delgado-Calle J, Bellido T, Roodman DG, Plotkin R, White F, Yoneda T
  • 学会等名: ASBMR annual meeting
  • 発表場所: Seattle, USA
  • 年月日: 2015-10-09 – 2015-10-12
  • 国際学会
• [学会発表] Reciprocal Interactions between Sensory Neurons and Tumor Cells Promote Breast Cancer Progression in Bone, Secondary Visceral Metastasis and Bone Pain (2015)
  • 著者名/発表者名: Okui T, Hiasa M, Nagata Y, White F, Roodman DG,Yoneda T
  • 学会等名: ASBMR annual meeting
  • 発表場所: Seattle, USA
  • 年月日: 2015-10-09 – 2015-10-12
  • 国際学会
• [学会発表] Contribution of osteocytes to cancer-associated bone pain via connexin43-mediated communications with sensory neurons under the acidic microenvironment in bone metastasis (2015)
  • 著者名/発表者名: Yoneda T, Hiasa M, Okui T, Ripsch MS, Delgado-Calle J, Bellido T, Roodman DG, Plotkin R, White F
  • 学会等名: 4th joint meeting of ECTS and IBMS
  • 発表場所: Rotterdam, The Netherlands
  • 年月日: 2015-04-25 – 2015-04-28
  • 国際学会