研究課題
本研究で用いたP0-Cre/CAG-CAT-EGFP遺伝子改変マウスは、胚発生時期の神経堤細胞特異的に活性化するミエリンプロテインゼロ(P0)遺伝子のプロモーターによりCreリコンビナーゼが発現し遺伝子組換えによって、神経堤細胞がその後分化してもGFPが産生されるため、各組織に存在する神経堤由来細胞はGFP陽性細胞として検出できる。毛包の組織解析から毛乳頭と、ケラチノサイトの幹細胞が存在するバルジ領域にGFP陽性細胞が局在した。遺伝子改変マウスより採取した毛包の全細胞数の僅か10%以下であったGFP陽性細胞は、FGFとEGF含有の幹細胞培地で培養すると割合が高くなり、培養2週後にはおよそ95%をGFP陽性細胞が占めた。同時にフローサイトメーターで解析すると、間葉系幹細胞マーカーの割合も増加した。以上の結果、毛包から未分化な神経堤由来細胞を、選択的に増殖させることに成功した。増殖させた神経堤由来細胞をBMP含有の骨芽細胞誘導培地で培養すると、アルカリフォスファターゼ(ALP)活性が上昇し、その活性はBMPの濃度依存的に促進した。石灰化の指標であるアリザリンレッド染色、Von Kossa染色共に陽性を示し、OsteocalinとOsterixの遺伝子発現も上昇した。さらに骨髄細胞との共存培養で破骨細胞形成を支持することから、毛包の神経堤由来細胞は骨芽細胞様細胞へ分化したことが明らかになった。また、脂肪細胞誘導培地によって脂肪細胞様細胞に分化したことから、多分化能をもつことも証明された。これらの結果、低侵襲で容易に採取できる毛包の神経堤由来細胞は、骨組織再生の極めて有効な細胞ソースとなり得ることが示唆された。
すべて 2016 2015
すべて 雑誌論文 (13件) (うち査読あり 12件、 謝辞記載あり 13件、 オープンアクセス 4件) 学会発表 (26件) (うち国際学会 5件、 招待講演 1件)
Bone Reports
巻: 5 ページ: 1-5
10.1016/j.bonr.2016.01.001
Biochem Biophys Res Commun
巻: 470 ページ: 813-817
10.1016/j.bbrc.2016.01.111.
Biomaterials
巻: 47 ページ: 62-71
10.1016/j.biomaterials.2015.01.004.
FEBS Open Bio
巻: 5 ページ: 303-307
10.1016/j.fob.2015.04.001.
European Cells & Materials
巻: 29 ページ: 290-312
Genomics Data
巻: 5 ページ: 115-119
10.1016/j.gdata.2015.05.012.
巻: 464 ページ: 1209-1214
10.1016/j.bbrc.2015.07.106.
Int J Oral Maxillofac Implants
巻: 30 ページ: 827-833
10.11607/jomi.3715.
J Tissue Eng Regen Med
巻: 9 ページ: 1310-1320
10.1002/term.1669.
Eur Surg Res
巻: 56 ページ: 1-18
10.1159/000441058.
巻: 467 ページ: 146-151
10.1016/j.bbrc.2015.09.092.
口腔組織培養学会誌
巻: 24 ページ: 1-8
細胞工学
巻: 34 ページ: 379-383