2016 年度実績報告書

口腔扁平上皮癌症例におけるＳＩＲＴ１細胞内局在の意義解明と予後予測法の確立

研究課題

研究課題/領域番号	26670876
研究機関	地方独立行政法人神奈川県立病院機構神奈川県立がんセンター(臨床研究所)
研究代表者	大津敬地方独立行政法人神奈川県立病院機構神奈川県立がんセンター(臨床研究所), がん治療学部, 主任研究員 (10270696)
研究分担者	野口映聖マリアンナ医科大学, 医学部, 助教 (10456395) 笠島理加地方独立行政法人神奈川県立病院機構神奈川県立がんセンター(臨床研究所), その他部局等, 特別研究員 (20630875) 野口誠富山大学, 大学院医学薬学研究部(医学), 教授 (50208328) 高野康雄地方独立行政法人神奈川県立病院機構神奈川県立がんセンター(臨床研究所), その他部局等, その他 (60142022) [辞退] 片山佳代子地方独立行政法人神奈川県立病院機構神奈川県立がんセンター(臨床研究所), その他部局等, 副技幹・主任研究員 (70584374)
研究期間 (年度)	2014-04-01 – 2017-03-31
キーワード	口腔扁平上皮癌 / SIRT1
研究実績の概要	我々は口腔扁平上皮癌において、SIRT1の細胞内局在の違いが予後と強く相関することを見出した。SIRT1が癌細胞の核内に局在すると抑制的に、細胞質に局在すると促進的に作用することが推測された。本研究では、SIRT1の二面性をin vitroで解析し、予後予測因子であるかを明らかにし、関連遺伝子の発現解析も併せて予後予測法の確立を目指している。まず、SIRT1の細胞内局在を確認することが、関連する遺伝子の選択や将来的なSIRT1の機能解析を行う上で重要と考えた。これまでにデータベースを基にSIRT1のNLS、NESに変異を導入した遺伝子を作製し、株化細胞での局在を調べたが、NESとされる領域に変異を導入してもSIRT1の局在に変化は見られなかった。そのため、これまで報告されているNESとして機能するアミノ酸配列がSIRT1に含まれるかを調べた。その結果、データベースに記載されたNESとされる配列とは別の場所にNES候補配列を見出した。この部位に変異を導入した遺伝子を作製し、株化細胞でのSIRT1細胞内局在を調べている。また、株化細胞において貧栄養状態によるSIRT1の発現および細胞内局在がどの様に変化するかをしるため、血清濃度を0.1%から10%まで変化させた培地で1日から7日間培養し、細胞質と核を分画した後にWestern blotによりSIRT1の局在を確認した。その結果、貧栄養により核内SIRT1が若干増加するものの、多くは細胞質に局在した。また、Myc1、HIF-1、Cortactin、について、細胞株で発現を確認した。