| 研究課題/領域番号 |
26670908
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| 研究機関 | 日本歯科大学 |
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研究代表者 |
石川 博 日本歯科大学, 生命歯学部, 客員教授 (30089784)
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| 研究分担者 |
中原 貴 日本歯科大学, 生命歯学部, 教授 (10366768)
畑 未有希 日本歯科大学, 新潟生命歯学部, 助教 (40707981)
豊村 順子 日本歯科大学, 生命歯学部, 助教 (80645630)
大山 晃弘 日本歯科大学, 生命歯学部, 准教授 (90538232)
富永 徳子 日本歯科大学, 生命歯学部, 助教 (90546532)
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| 研究期間 (年度) |
2014-04-01 – 2016-03-31
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| キーワード | ヒト歯肉上皮幹細胞 / 唾液腺線維芽細胞 / 共培養 / 3次元唾液腺構築 / HIF-1α / VEGF / 介在部 / 移植 |
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| 研究実績の概要 |
高齢化社会で増加する口腔乾燥症を再生医療で治療する基礎実験として、我々はすでにヒトの頬脂肪体から間葉系幹細胞を分離し、これを唾液腺由来の線維芽細胞と共培養して、唾液腺腺房上皮細胞に分化誘導することに成功している（Kawakami M.et al. Human Cell, 2016）。そこでより採取容易なヒトの歯肉から唾液腺を分化誘導しようと考えた。歯肉上皮の小片から上皮細胞を分離し、Friedenstein法にて上皮幹細胞を単離した。これをヒト唾液腺由来線維芽細胞と共培養して唾液腺上皮細胞へと分化誘導した後、還流培養により3次元唾液腺を構築させることに成功した。実態顕微鏡下に3次元唾液腺より介在部を採取し、cell lineを樹立した。この細胞は接着不能ｼｬｰﾚを用いた静置培養下で3次元唾液腺を構築する。しかし、腺胞上皮細胞からは唾液腺は構築できなかった。次に、我々が樹立した筋上皮株細胞（産総研ならびに理研細胞銀行に寄託）を3次元唾液腺と共に旋回培養したが、筋上皮細胞は腺房には付着しなかった。現在、アテロコラーゲンビーズに筋上皮細胞を付着させ（細胞ビーズ）、この細胞ビーズと唾液腺とを混和して培養している。3次元唾液腺あるいはこの介在部を移植する際、活着するか否かを検討するため、移植片がHIF-1αとVEGFを産生するかをELISA法でAssayした結果、大量のHIF-1αとVEGFを産生することが判明した。HIF-1αの産生を抑制するとVEGFの産生量は半減した。この結果からHIF-1αはVEGFの産生を誘導するが、VEGFの産生にはHIF-1α以外の誘導物質があると思料される。現在、scidマウスの唾液腺に放射線照射して作製した唾液腺不全マウスの顎下腺と口腔粘膜下に分化誘導して作成した3次元唾液腺あるいはその介在部を移植し、唾液腺分泌を観察している。
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