研究課題
本申請で対象とする、高等真核生物を特徴づけるRNA転写後修飾の化学構造形成に関わる生合成遺伝子の探索を行い、ヒトミトコンドリアtRNA-Metのウォブル位シチジンを5-メチルシチジンにメチル化するNSUN3の報告以降、(1) 5-メチルシチジンから5-ヒドロキシメチルシチジンを経て5-ホルミルシチジンへの2段階の酸化反応を担う酵素ALKBH1についての成果を論文と学会発表によって報告した。本年度はALKBH1が基質として認識するtRNA-Metについて、野生型およびミトコンドリア病と相関する点変異を持つ複数種の変異型tRNA-Metを試験管内転写で作成し、酸化反応への疾患型変異の影響を調べたところ、ALKBH1は点変異により反応を阻害されないことが判明し、変異の影響を受けうるNSUN3とは異なる基質認識性を持つことを見いだした。NSUN3とALKBH1の遺伝子ノックアウト(KO)細胞における細胞内ミトコンドリアタンパク質合成への影響を調べるため、ミトコンドリアリボソームプロファイリングを実施し、シーケンスデータを取得した。このデータについて引き続き解析を行う計画である。(2)これまでに同定した糖転移型RNA修飾酵素に関し、取得した組み換えタンパクを用いた酵素の基質tRNAおよび糖ヌクレオチドに対するキネティクス解析を行い、基質tRNAに対する相対的に強い親和性(10^-7オーダー)を見出した。また樹立した遺伝子KO細胞のストレス環境下での生育阻害の可能性を探索したが、検討した10種以上のストレス条件下における生育への影響は、現在までに見いだすことができなかった。一方で修飾を受けるtRNAに対応するテストコドンを組み込んだルシフェラーゼによるレポーターアッセイ系を構築し、コドン解読能に対する直接的な影響を評価している。
29年度が最終年度であるため、記入しない。
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すべて 雑誌論文 (3件) (うち査読あり 3件、 オープンアクセス 3件) 学会発表 (6件)
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