全ゲノム操作が拓く難培養細菌の遺伝子工学

2018 年度 研究成果報告書

• 研究課題/領域番号: 26710015
• 研究種目: 若手研究(A)
• 配分区分: 一部基金
• 研究分野: システムゲノム科学
• 研究機関: 国立研究開発法人産業技術総合研究所
• 研究代表者: 柿澤 茂行 国立研究開発法人産業技術総合研究所, 生命工学領域, 主任研究員 (10588669)
• 研究期間 (年度): 2014-04-01 – 2019-03-31
• キーワード: 細菌 / ゲノム

研究成果の概要

スピロプラズマという細菌の全ゲノムをクローニングするため、まずゲノムをrare-cutterの制限酵素によって切断し、バンドパターンをパルスフィールドゲル電気泳動によって確認した。次にこれらの切断断片をTAR cloning法を用いて酵母細胞内にクローニングした。得られたクローンをJunction PCR、Multiplex-PCR、パルスフィールドゲル電気泳動などの手法によって確認し、多数のポジティブクローンを得た。ポジティブクローンのインサートの全塩基配列を次世代シーケンス解析により解読した結果、塩基配列の変異はほとんど認められず、正しい配列がクローニングできていることが分かった。

自由記述の分野

細菌ゲノム学

研究成果の学術的意義や社会的意義

難培養細菌（難培養性細菌・未培養細菌）と呼ばれる細菌は、培養が不可能もしくは非常に困難な細菌である。難培養細菌は決して珍しいものではなく、環境中の微生物の99%以上は培養できないことが明らかとなっている。細菌のゲノムを自在に改変する技術はいくつか報告されているが、難培養細菌に応用できるものは限られている。本研究では細菌ゲノムを丸ごとクローニングして配列を改変することで、難培養細菌の遺伝子を改変することを目指し、そのための全ゲノムクローニングを行った。得られた結果は、今後の細菌ゲノム研究の発展に寄与すると考えられる。