| 研究課題/領域番号 |
26711005
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| 研究機関 | 名古屋大学 |
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研究代表者 |
阿部 一啓 名古屋大学, 細胞生理学研究センター, 助教 (60596188)
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| 研究期間 (年度) |
2014-04-01 – 2018-03-31
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| キーワード | 胃プロトンポンプ / H,K-ATPase / P-type ATPase / 膜タンパク質 / 電子線結晶学 / 極低温電子顕微鏡 / 能動輸送体 |
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| 研究実績の概要 |
膜輸送体の中でも最大級のイオン（プロトン）濃度勾配を形成できる胃プロトンポンプの作動機構の理解の為に、本年度は以下の項目についての成果が得られた。
（１）イオン輸送サイクルの構造解析
E2P状態におけるいくつかの構造を電子線結晶学によって決定し、これまで報告した他の構造と合わせて分子のコンフォメーションを体系的に比較することで、E2P状態において引き起こされる重要なイベントである、胃管倥へのイオンのゲーティングに必要なメカニズムを明らかにした（Abe et al., 2014 J. Biol. Chem.）。
（２）プロトンポンプ組み替え体発現系の構築
哺乳動物細胞を用いた発現系の構築に成功した。いくつかの変異体による機能解析を進めている。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
イオン輸送サイクルの構造解析を進めることができた。
発現系の構築も順調に進んでいる。
高分解能構造解析については、これまでで最も分解能の高い立体構造が得られているが、さらに分解能を亢進する為に引き続き研究を推進する。
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| 今後の研究の推進方策 |
イオン輸送サイクルの構造解析では、E1, E2状態の構造解析を目指す。
胃酸抑制剤の結合した構造によって高分解能化を進めているが、得られた構造情報に基づいて、変異体や類縁化合物を用いた阻害剤結合様式の同定を進める。
大量発現系の構築、及びクリーンバイオケミストリーの実現に向けた安定な再構成系の確立を目指す。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
前年度に計画していた昆虫細胞による発現系の構築が、早い段階で全く役に立たないとこが判明したので、哺乳動物を用いた発現系を利用することにした為。
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| 次年度使用額の使用計画 |
予定していた昆虫細胞発現系に係る予算を、哺乳動物培養関連品に充てる予定である。昆虫細胞よりも必要な消耗品が高額であり、また初期投資として培養器具や消耗品に使用する予定である。
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